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    收到的细胞脱落了?碎片多?黑点多?教你如何处理

    发布时间: 2021-11-26  点击次数: 556次

    科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型,这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。



    而在收到细胞库寄送来的常温细胞时,常常会遇到一些问题,比如细胞脱落皱缩有黑点


    这篇文章将帮助大家解决这些常见问题。



     收货时,细胞脱落

    01



    有些细胞本身贴壁不牢,很容易脱落(如293系列,TM3,TM4,Raw264.7,原代内皮细胞,原代平滑肌细胞)。


    另外,运输过程中受到碰撞或气温过低,也可能导致细胞脱落。


    处理办法

    ① 脱落的细胞进行离心收集,并在离心管中消化

    ② 仍然贴壁的细胞,按照常规方法加入胰酶或其他解离剂消化。

    ③ 再将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合,按比例接种到新的培养器皿中。


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    ▲ 常温运输的C2C12细胞收货时发现脱落


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    ▲C2C12处理后第二天,

    有少量漂浮细胞

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    ▲C2C12处理后第四天,

    细胞正常生长

    (图片由客户提供,仅供学习参考)


     收货时,细胞皱缩

    02



    运输过程中,路途颠簸加上温度不稳定,常温细胞会发生回缩。


    处理办法

    放入培养箱静置2-4小时,若4小时后仍然没有伸展,延长静置时间。注意,过夜静置时,需倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松透气,保持气体交换(L15培养体系除外)。

    若有脱落细胞,需离心收集。


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    ▲SH-SY5Y细胞发货前状态

    (普诺赛提供)

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    ▲SH-SY5Y细胞收货后状态
    (客户提供)

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    ▲ SH-SY5Y细胞收货时

    皱缩、脱落

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    ▲ SH-SY5Y细胞

    处理后第三天

    (图片由客户提供,仅供学习参考)


    收货时,细胞黑点较多

    03



    当受到运输环境影响时,细胞会发生应激反应,分泌活动增加,导致分泌蛋白增多,呈黑色圆球状,分布无规律。


    同时,路途中凋亡的细胞碎裂后将产生细胞碎片,为黑色或透明色,呈不规则状,分布无规律。


    另外,有些细胞本身分泌活动较强,培养时常伴随黑点。


    处理办法

    贴壁细胞放培养箱静置2-4小时后,正常换液或传代;

    悬浮细胞800~1000rpm(约160~200g) 低速离心3min去除碎片。通常培养数天后,细胞状态会逐渐稳定下来。


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    ▲ KYSE-30细胞收货时

    观察到碎片

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    ▲ KYSE-30细胞继续

    培养后碎片减少

    (图片由客户提供,仅供学习参考)


    小贴士:遇到小黑点问题时,首先要排除微生物污染,再按以上办法解决哦~


    细胞碎片/分泌物和微生物污染的区别


    _

    细胞碎片/分泌物

    微生物污染

    形态

    大小不一的黑色圆点,不规则形状

    圆球状或杆状,

    形态非常规则

    是否运动

    原地震动,布朗运动

    或相对液体静止

    快速游动,快速转圈或

    相对液体静止

    分布情况

    视野中分布无规律

    视野中分布均匀

    增长情况

    无抗生素条件下

    不增多或缓慢增多

    无抗生素条件下

    48-72小时内爆发式增多




    细胞碎片

    (由客户提供,仅供学习参考)







    微生物污染

    (由客户提供,仅供学习参考)





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