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    H22腹水传代怎么做?掌握这些就够了

    发布时间: 2022-06-02  点击次数: 75次

    H22(小鼠肝癌细胞)分离自小鼠腹水,由大连医科学院建立。在实验研究中,常将H22细胞接种于小鼠皮下,建立异位移植模型,广泛用于抗肿瘤药物药效学初步筛选。


    基础信息


    生长特性:

          悬浮细胞

    细胞形态:

          淋巴母细胞样

    生长培养基:

          RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

    推荐传代比例:


    3×10^5-5×10^5cells/mL

    推荐换液频率:


          2~3次/周

    冻存液:

          55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

    培养条件:

         气相:空气,95%;CO2,5%

         温度:37℃



    腹水传代培养


    了解完细胞的基础信息,我们就可以着手准备细胞培养了。小培已经为大家总结好了详细的腹水传代步骤,希望能对大家有所帮助!


    1

    H22体外培养至合适密度后,离心(1200r/min,3min)收集细胞,用PBS重悬备用;

    2

    取0.2mL培养好的细胞计数(细胞密度为1*10^7/mL)后,腹腔注射至小鼠腹腔;

    3

    饲养5-6天,小鼠腹水可收集(4-8mL);

    4

    采用无菌抽取或解剖收集腹水后,用PBS稀释2倍后离心(1200r/min,3min),去上清,重复洗涤过程1-2次,加入10mLPBS重悬制备成细胞悬液备用;

    5

    取50mL离心管加入10mL小鼠外周血淋巴细胞分离液,上层加入10mL细胞悬液,离心收集沉淀(2000r/min,10min),重复2-3次;

    6

    将收集的沉淀用1640培养基重悬,接种于T175培养瓶中,接种密度为4*10^5 /mL,放置培养箱培养8-12h;

    7

    收集细胞悬液离心(1200r/min,3min),用程序冻存液将细胞冻存,冻存密度为10^7/mL。



    注意事项


    掌握以上培养步骤就一定可以培养好细胞吗?你还需要掌握以下这些注意事项 :

    1

    新手可以选择处死小鼠,然后先用注射器吸出一些细胞,再剪开腹腔,用枪吸出剩下的;熟练了可以不处死小鼠,直接注射器插进去吸,小鼠还能重复接种;

    2

    注意不要戳破内脏,否则容易造成细胞交叉污染;

    3

    小鼠饲养时间控制在5天为佳。时间过长,小鼠会死亡或收集的腹水中红细胞含量过高;

    4

    复苏之后会有死细胞,但不影响正常腹水的产生;

    5

    H22体外培养增殖几代就需要腹水培养一次,否则细胞状态会急速变差,碎片增多。做实验需提前扩增至所需的细胞量然后冻存起来,长期培养需5代内腹水培养一次;

    6

    中间每一次传代可以先离心,PBS或生理盐水重悬后打给下一只;

    7

    收集腹水红细胞过多时,可以用红细胞裂解液去除;

    8

    用分离液分离细胞时,可多次分离筛选,保证细胞的纯度;

    9

    冻存细胞最好分离出来后培养8个小时左右再冻存,可以有效去除可能没有筛出去的血红细胞,还可以让细胞的状态调整至最佳;

    10

    细胞活力不一样、接种细胞量不一样,腹水长出的时间就不一样。接种是否成功可以通过观察老鼠的状态来确定,接了腹水的老鼠活动力会变弱。




    常见问题及解答


    关于H22细胞腹水传代,小培将大家疑问较多的问题,总结如下。

    01

     H22腹水传代可以用哪些小鼠?

    可以用balb/c小鼠、Km小鼠等,体重在20g左右。

    02

    细胞收货有哪些注意事项?

    到货后,请将细胞瓶竖立着静置2~4h,然后把瓶中培养基上面部分培养基小心吸出,留底部细胞和3mL左右培养基在原瓶。吸出的细胞离心收集细胞沉淀,离心转速1200转3分钟。

    03

    为什么刚到货的H22细胞会出现细胞聚团?

    悬浮细胞发货时密度不能太低,因路上运输,状态不稳定,刚到货时可能会出现聚团的情况。待稳定培养几天,聚团会消失,需要注意培养时少动细胞,以免损伤细胞。



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