siRNA转原代肌腱细胞转染试剂
一、产品说明：
1、产品名称
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
2、品牌
ZETA LIFE
2、包装规格
货号：AD600075
规格：0.75ml
3、储存条件
常温运输，4℃保存，可保存两年，拒绝反复冻融。
二、使用说明：
1、材料准备
RNA 浓度 20 uM /L
质粒 DNA 浓度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素 ）
2、操作步骤
提前 1 天接种细胞：细胞汇合度在 60-80%左右，再进行转染。
核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混匀，室温静 止 10-15 分钟。
在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基 里面可以含有血清。
细胞换液：转染 24 小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。
分析结果：质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率，48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率，48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。
三、注意事项：
1、质粒 DNA 必须溶解于无菌双蒸水或超纯水，但不能溶解于提取试剂盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的质粒转染效率会下降 80%左右，甚至会转染失败。
2、质粒必须去除内毒素，内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性，会导致转染效率下降 70%-80%左 右，甚至导致转染失败（推荐使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去内毒素质粒提取试剂盒）。
3、复合物的制备过程中是绝对不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释，只需将核酸和转染 试剂两者按 1:1 比例直接混合，如果进行了稀释会导致转染失。
4、转染试剂与核酸混匀后用移液器吹打 10-15 次，室温孵育 10-15 分钟后即可加入细胞培养板。
5、转染 24 小时后进行正常换液，不能像 Lipo2000 一样转染 4-6 小时后换液。
6、原代细胞、免疫细胞转染时，细胞基础培养基里面不能含有双抗培养基。
四、各品牌转染试剂类型与Zeta Life转染试剂的差异比较：
1、Thermo品牌Lipo 2000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是毒性大；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果差）。
2、Thermo品牌Lipo 3000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是相比Lipo 2000毒性略小；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果较差）。
3、Thermo品牌RNAiMAX采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是专门用来转RNA，对于细胞系的转染效率一般，对干细胞和神经原代细胞转染效果差。
4、Promega品牌FuGENE 6采用脂质混合体、特定缓冲液，需要更换培养基；特点是本质还是脂质体；只能转DNA；含有微量动物源成分，适用细胞种类因此受限；转染前后需要更换培养基；亲塑性，转染效率会因使用PE管（塑料管）而大打折扣。
5、Roche品牌FuGENE HD采用脂质混合体、特定缓冲液，需要更换培养基；特点是本质还是脂质体；只能转DNA；亲塑性，转染效率会因使用PE管（塑料管）而大打折扣。
6、Zeta Life品牌Advanced系列采用新型工业材料，不需要更换培养基；特点是不需要换液，无细胞毒性，转染效率高，适用细胞种类多，可转染质粒DNA、siRNA及小动物活体转染。
siRNA转原代肌腱细胞转染试剂各规格：
品牌：美国Zeta Life 货号：AD600025 0.25ml
品牌：美国Zeta Life 货号：AD600050 0.5ml
品牌：美国Zeta Life 货号：AD600075 0.75ml
品牌：美国Zeta Life 货号：AD600150 1.5ml
品牌：美国Zeta Life 货号：AD600500 5ml
品牌：美国Zeta Life 货号：AD601000 10ml
