内皮细胞的培养方法及内皮微粒的表达

内皮细胞是每个组织中不可少的传导工具，包括万恶的肿瘤，也是在初发阶段，血管先扩增一波，从而大面积进攻组织，内皮细胞怎么提取培养呢？

原代内皮细胞分离一般采用的是组织酶消化法，不要天真的以为您只要酶消化下来的细胞都是内皮细胞了 ，有可能也有成纤维细胞哦 ，这就牵扯到怎么抑制成纤维细胞的生长，让内皮细胞赶快成长起来的方法了。

内皮细胞一般采用内皮细胞*培养基来维持细胞生长，需要注意的是才分离出来的细胞一般都不会采用无血清的培养基培养，因为无血清的培养基可能会导致细胞会有不贴壁的现象发生，需要更换无血清培养方式需等细胞稳定后才可开始更换无血清组分，按比列循序渐进更适合细胞的生长，这也是有些老师在提取原代的时候使用细胞包被液包被培养瓶的原因。 

  内皮细胞培养的时候对培养基的要求很高，即使是细胞株HMEC-1也必须要使用MCDB这种不是很常规的基础培养基 ，然后加血清，加EGF,加胰岛素才能好好生长，所以细胞培养方式不对 ，努力就会白费，不要用很激进的方法去改变任何细胞的培养方式 ，因为这样会让细胞的部分基因丢失从而导致细胞变异；内皮细胞培养需要勤换液，因为他们的分泌比较多，特别在代次不好的时候会很明显。

   原代内皮细胞一个特别显著的特征就是在细胞代次比较好的时候它们消化需要的时间特别短，彷佛这边才加上胰酶那边就马上需要终止了 ，对胰酶比较敏感，而传代次数太多的细胞或者内皮细胞株就表现不一样了 ，加上胰酶之后它就像个没有睡醒的孩子一样 “吹吹打打"才能下来。

内皮微粒具有转运蛋白、RNA等信号分子的功能，在调节血栓形成、动脉粥样硬化发生、炎症反应、血管功能中发挥着重要作用。

  内皮微粒表达很多内皮特异性的分子，如CD31、CD146、CD62E、CD51 CDl44， 凋亡诱导下的内皮微粒CD31、CDl05表达增加，促活化因子诱导下CD54、CD62E表达增加；促血栓形成状态下，内皮微粒表面的促凝血因子active tissue factor （TF） 、platelet factor 3表达增加。由于内皮微粒表面携带有大量内皮细胞的表面蛋白和生物信息，在不同的病理和生理情况下表达情况发生改变，是非侵袭性的监测内皮细胞功能的潜在标志。

  内皮细胞也是目前研究使用最多的原代细胞，这和它的功能密不可分，cell systems提供37种原代内皮细胞，细胞不采用抗体分选细胞无抗性 ；单管细胞达100万以上的细胞量，减少您实验购买细胞的经费。