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    细胞培养无小事——如何选择血清?

    发布时间: 2021-09-29  点击次数: 217次

    体外培养的细胞直接生活在培养基中,因此培养基需要满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求;原代提取的时候选择如何选择培养基成了关键的问题,此外在细胞提取的时候因血清可以模拟个体的生存环境,在提取细胞的时候血清一定不可少。

      维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面:氨基酸,单糖,维生素,无机离子与微量元素,此外还有促生长激素,渗透压,pH 值,并保证在配制试剂的时候无毒无污染。

    正常的培养细胞的培养基无非是基础培养基加血清。血清是一个神秘的试剂,至今为止,它在细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。

    血清的主要成分: 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等。


      血清主要作用:提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。

    血清的判断标准如下:好的血清应该是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。如发现血清浑浊、不透明、含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性;一般血清反复冻融或者有支原体污染的时候都会出现血清沉淀多的情况,若血清呈棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,取材时有溶血现象;如果摇晃时感觉液体稀薄,说明血清中掺入的生理盐水太多。如果要进一步了解血清的质量,则应连续培养某些细胞,观察细胞生长状况。


      质量一般的血清在使用的时候建议灭活,即56℃30分钟,主要是为了防止血清中的补体成分对细胞产生毒性,一般的血清不需要灭活,因为加热也会导致一些刺激因子和蛋白的流失,不利于细胞的生长。

      血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。反复冻融会导致血清中的蛋白释出,从而会沉淀增多,购买大包装的血清后,首先要灭活处理,然后分装成小包装,储存于-20℃,使用前4度慢融。不同批次的血清会有很大的差异性,为了实验统一和可重复性,建议购买血清之前先索取试用装进行测试,选定一批后就要保留足够使用6个月至1年的量,直至用另一批经过预先试验的样品代替。


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