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    细胞培养的小常识

    发布时间: 2021-10-19  点击次数: 607次

    细胞体内外培养的差别是什么?

    答:细胞离体后,失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响,生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中,日久天长,易发生如下变化:分化现象减弱;形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡;或发生转化获得不死性,变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此,培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体,它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能,也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后,这种差异就开始发生了。


    二倍体细胞有什么特点?

    答:二倍体细胞的染色体组型是2n核型;贴壁依赖接触抑制;一般可传代培养50代;无致瘤性。如W1-38:正常胚肺组织人二倍体细胞系。MRC-5:从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 


    什么是动物细胞大规模培养?                

    答:所谓动物细胞大规模培养技术(large-scale culture technology)是指在人工条件下(设定pH、温度、溶氧等),在细胞生物反应器(bioreactor)中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO(中华仓鼠卵巢)细胞、BHK-21、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等,并已成功生产了包括狂

    犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。

    在过去几十年来,细胞培养技术经有了很大发展,从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube等贴壁细胞培养,发展为生物反应器(Bioreactor)进行大规模细胞培养。

     

    培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

    答:一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在三到四周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。


    细胞培养基偶然被冻,可否继续使用?

    答:如果细胞培养基偶然被冻,您应该自然溶解培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基

     

    培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗?

    答:大部分添加物和试剂最多可以冻融3次,如果次数过多会将使液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?

    答:要冷藏!!通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月到一年。


    CO2 培养箱之水盘如何保持清洁?

    答:定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。


    购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?

    答:研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养

    购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

    答:研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因比较复杂,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳;血清使用错误或血清的品质不佳;解冻过程错误;冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心;悬浮细胞误认为死细胞;培养温度使用错误;细胞置于–80 ℃太久等。建议严格参照ATCC或ECACC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。


    冷冻保存细胞之方法?

    答:冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃(30-60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16-18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。


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