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    细胞到货后应该如何处理呢?

    发布时间: 2021-10-20  点击次数: 1143次

    刚收到细胞未开封,疑似污染,应当如何处理?

    收到细胞后,请先观察外观是否存在漏液、破损等情况,并拍照(40X、100X、200X)。发现任何问题,都请及时联系我们的销售,并提供您细胞不同倍数的照片。如询问后确定无明显污染,请取出10ml培养基空培养,细胞按照说明书正常操作处理即可。


    Q:刚收到细胞,显微镜观察细胞成片漂浮,该如何处理?

    除293系列、LNCAP、SH-SY5Y、MSTO-211H、INS-1、HT-22这些易漂浮的细胞外,大部分细胞在温度低时细胞回缩变圆,漂浮的可能性也会增大。建议延长稳定时间,约4小时后观察。若细胞仍不贴壁,取出所有灌装培养基,离心收集细胞,去上清将细胞弹散,在离心管中加入1ml胰酶轻轻混匀,将离心管平放(注意胰酶细胞悬液不要沾到瓶盖以免损失细胞),消化约3分钟后加入2~3ml终止液,1000rmp,5min离心,去上清将管底细胞团尽量弹散,加入完全培养基重悬(轻轻吹吸1~2次),均匀转入2个T25瓶中,摇匀后放入培养箱中培养。


    Q:贴壁细胞传代2~3次后增殖变慢,有黑点,如何操作?

    可能是消化过度导致了部分细胞的细胞膜受损、凋亡,部分细胞膜受到破坏,导致细胞生长缓慢。若细胞形态有明显变化,且细胞表面有明显黑点,间隙间也有较多黑点,可能是支原体污染,建议空培养细胞培养基,观察黑点是否会增殖。

    若还有保种细胞,请复苏靠前代次,并注意观察拍照,有任何问题可以及时联系我司销售处理售后(需提供细胞图片)。


    Q:收到冻管复苏24小时,细胞不增殖,该如何处理?

    冻管到货时的剩余干冰情况、收货后的保存情况、使用的血清、培养基以及复苏操作不当等原因都可能影响细胞复苏情况。

    贴壁细胞:

    若复苏时离心,建议48h后换液,如密度达到10%,则继续按说明书正常操作培养;若复苏时没有离心,建议收集悬浮细胞后重新接种。若细胞依然无贴壁增殖,请及时反馈销售处。

    悬浮细胞:

    建议复苏48小时后观察拍照,若培养基没有变色,部分细胞仍然比较圆润,可继续放置培养后48小时拍照。若细胞全部皱缩,请及时联系销售处理售后。


    Q:细胞出现空泡是为什么?

    可能原因如下:

    1. 没有及时换液,导致培养基酸度增强、营养成分降低时会出现细胞胞浆产生及空泡;

    2. 没有及时传代,细胞生长过密,少数细胞开始在铺满的第一层细胞上生长。很多细胞开始漂浮时,也有部分细胞出现空泡变性;

    3. 若密度很低,则细胞密度提高会有所改善,可以提高血清浓度或更换质量更好的血清。若密度高,请及时更换培养基,注意培养基添加量和换液情况,保证细胞有足够营养。


    Q:细胞为什么消化不下来?

    细胞消化时间一般在2~3min,消化期间请不要晃动培养瓶,部分细胞需要延长消化时间,或用PBS清洗2次,吸干净瓶里残留的PBS后用少量胰酶润洗,再次添加1ml胰酶进行二次消化。

    消化时放入培养箱,2~3分钟后取出,用手掌心拍打瓶尾观察细胞脱落情况,如没有细胞脱落则继续放培养箱。如果消化5分钟也没有脱落或只有轻微细胞脱落,可以继续放培养箱,或把消化下来的细胞收集终止消化后,将培养瓶内的细胞继续添加1~2ml胰酶继续消化。

    当细胞有80%左右脱落且成单个细胞后,可终止消化,用吸管吹打瓶里各部位4~8次,尽量用吸管不用枪头,不要吹出气泡,然后收集悬液进行离心。


    Q:细胞形态为什么会改变?

    刚收到的细胞如更换了培养基或血清,会存在变形的情况,属正常情况,需要一定的适应过程。当体外培养时间增长后,随着传代次数的增多,细胞形态也会有触角、拉丝、变瘦等变化,可能与消化时间和培养条件有关。


    Q:收到的细胞里有异物,或传代后有异物?

    可能原因如下:

    1. 可能是棉球纤维、凋亡细胞片、血清蛋白,或一些无血清培养基添加因子后的因子析出物,属于正常现象;

    2. 如果是传代后细胞堆积成团,肉眼可见白色点状物,则是消化没有吹散开或消化过度导致的细胞抱团自救,建议在细胞密度变高后改善消化过程。


    Q:传代后细胞增殖缓慢或不增殖,凋亡细胞多?

    消化过度可能导致部分细胞的细胞膜受损、凋亡,导致细胞生长缓慢。可以用PBS洗掉凋亡细胞后,提高一定血清浓度培养,并且改善消化时间。


    Q:常见细胞污染有哪些?

    · 细菌污染

    细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,镜下可见黑色的到处乱跑的黑点。细胞一旦出现细菌污染,爆发会很快,培养基很快会出现浑浊,且细胞状态明显变差。

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    · 真菌污染

    一般培养液清亮不变色,镜下有丝状物。有些真菌开始很像死细胞碎片,只是有很多很多的小块很清楚,呈珊瑚状,不像细胞碎片分不清,慢慢会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现。

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    实验室较典型的污染真菌是白色念珠菌,它存在于人的口腔和生呼吸道等处。

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    · 霉菌污染

    培养基是清亮的,倒置显微镜下无杂质。在37度孵箱中培养2~3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见明显菌丝。长时间后,细胞虽然仍可生长,但活力状态变差。

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    · 支原体污染

    支原体为黑色小点,培养基一般会浑浊。支原体感染细胞后,细胞病变不明显,只是慢慢死亡。




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