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    细胞不长,这些方面您注意了吗?

    发布时间: 2021-10-25  点击次数: 524次

    Q1

    培养液pH对细胞生长的影响?

    答:由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响,目前也有些无血清培养基或者转染用的培养基PH值会在6.5左右。因为各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右


    Q2

    培养液pH下降很快可能原因有哪些?其解决方法是什么?


    答:通常细胞生长得非常快时,pH值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外,培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。

        (1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度,2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。

        (2)改用不依赖CO2培养液。

        (3)松开瓶盖1/4圈。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。

        (4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。

        (5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。


    Q3

    培养基中丙酮酸钠的作用是什么?



    答:丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

    Q4

    Hank′s平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?


    答:HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hanks′液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagle′s液,。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks′液就可以了。


    Q5

    培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?



    答:一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。


    Q6

    培养细胞出现死亡其可能的原因有什么?解决办法有哪些?



    答:可能的原因有培养箱内无CO2;培养箱内温度波动太大;细胞冻存或复苏过程中损伤;培养液渗透压不正确;培养液中有毒代谢产物堆积等。

         解决办法可以检测培养箱内CO2浓度,检查培养箱内温度;取新的保存细胞种;检测培养液渗透压,换入新鲜培养液等。


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