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    难转染细胞Thp-1高效率转染条件分享

    发布时间: 2021-11-10  点击次数: 247次

    Thp-1细胞高效率转染条件分享


    一、转染材料准备

    1. 转染试剂用量:10ul

    2. siRNA浓度:20um/L

    3. 细胞密度:1*106-1*105

    4. 转染用培养板:6孔板

    5. 转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600150

    6. 转染时间:48小时

    7. 细胞培养胎牛血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

    8. 细胞冻存液:L0100无血清细胞冻存液.

    注意:本细胞转染用量条件不适合lipo使用。

    难转染细胞Thp-1高效率转染条件分享

    二、操作过程:

    1.提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。

    2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合,用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。

    3.在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清。

    4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

    5.分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。



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