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    高效转染质粒大小10646bp、HGF-1牙龈成纤维细胞的操作方法

    发布时间: 2021-11-11  点击次数: 282次

    高效转染质粒大小10646bp、HGF-1牙龈成纤维细胞的操作方法

    转染条件

    细胞密度:60左右

    质粒DNA浓度:648ng/ul

    质粒DNA大小:10646bp

    培养板:6孔板

    转染试剂用量:8ul

    质粒DNA用量:电讯

    转染试剂:AD600150,Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂

    转染时间:48小时

    血清:Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

    细胞冻存:CE70100T无血清细胞冻存液

    细胞活力检测:K009-500,CCK8


    操作方法

    提前 1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。

    核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 分钟。

    在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基 里面可以含有血清。

    细胞换液:转染 24 小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

    分析结果:质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率,48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率,48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。


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