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    细胞转染总是失败?一文教你如何做好细胞转染实验

    发布时间: 2021-11-25  点击次数: 1585次

    细胞转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。其在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等实验和应用中使用越来越广泛。然而,转染效率低下却一直是科研工作者们经常遇到的一大难题。尤其是原代细胞转染,更是因为难度大,效率低从而使得科研人员们头痛不已,谈“转染"色变······

     

    这里,小编根据收集做细胞转染多年的经验和体会,总结出了以下导致细胞转染效率低下,经常“翻车"的大坑,以及避免掉坑里的一些做法。

     

    影响细胞转染效率的因素, 转染中经常翻车的点

     

    影响转染效率的因素有很多,细胞株本身的特性和活性,细胞培养条件,转染的DNA 或RNA 的质量, 转染方法,转染试剂的选择等。

     

    一、准备不充分、转染条件不佳

     

    一般情况下,做细胞转染时除了必要的试剂、细胞和DNA等要准备充分外,实验的条件和操作步骤要求等都应该严格遵守。比如:脂质体的用量、DNA浓度、细胞密度、脂质体和DNA混合孵育时间等。只有避免这些人为因素导致的低级错误才能更好地分析提高转染效率的方法。

     

     

    二、细胞问题:状态不好、污染等

     

    对于细胞转染实验,细胞自然是其中较为重要的实验材料之一。在实验室时,每次细胞转染之前都要检查细胞状态和细胞密度是否合适。一般进行转染的细胞应该是在对数生长期,如果不合适或细胞状态太差,那宁可晚几天做转染,也不能盲目地去做实验。否则只会偷鸡不成蚀把米,大大影响后续的实验结果。

     

     

    三、转染的DNA质量不好:浓度太低、克隆不对等

     

    当我们在做细胞转染实验时,需要转染的质粒DNA的质量也是影响转染效率的一大因素。如果DNA的浓度太低、纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会导致我们转染效率低下甚至失败。此外值得注意的是,实验中常常需要转染的并不是质粒DNA,而是RNA。对于转染RNA而言,我们一般推荐Zeta Life公司Advanced系列转染试剂,它的优势是市面上所有的RNA ,Zeta Life 公司Advanced系列转染试剂都可以转染。这是一种采用的是新型小分子多肽材料,其特点是非脂质体材料,可通过细胞主动吞噬吸收进入细胞,进入细胞后可以被代谢。之所以选择这一款产品,主要是由于其具有超高的转染效率,对细胞无内毒素影响,不易出现细胞死亡,易于优化,具有出色的转染效率,适用细胞种类多,以及简单快速的实验方案等优点。

    实验过程中,只需在细胞融合度为在60%-80%时进行细胞转染,质粒DNA(或RNA)与转染试剂直接1:1混合,无需分别稀释再混合。全程使用含血清的完全培养基,不需要转染前后两次更换培养基。使用简单、快速且具有很高的转染效率。

     

     

    四、细胞本身转染困难

     

    对于细胞本身转染困难这个问题,就并非人为原因了,细胞类型的不同相应的转染效率也会差很多。尤其是对于最难转染的干细胞,就更是令大家伙头疼,甚至让大家闻之色变。但是,屏幕前的读者可能想不到,其实对于很多有经验的科研人员来说,在多能干细胞(PSC)和神经干细胞(NSC)这些细胞中,照样能获得高达80%或更高的转染效率,在间充质干细胞(MSC)中获得高达45%的转染效率。至于他们是如何做到如此优秀的?用的就是Zeta Life公司Advanced系列转染试剂。各种细胞类型中最高的转染效率。可用于多种真核细胞系的DNA转染、siRNA转染和共转染;可用于各种原代细胞的DNA转染、siRNA转染;可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞、原代细胞、干细胞等。

     

     

    五、转染试剂选择不对

     

    转染试剂的好坏,直接影响了细胞转染实验的成败。如果,你对于现今市面上复杂的转染试剂还不了解,那么这款Advanced DNA RNA Transfection Reagent就是你的最佳选择!

    Advanced DNA RNA Transfection Reagent转染试剂采用中新型小分子多肽材料,包含了较为先进的小分子材料转染技术,能够提供高效的转染性能,改善相关应用的结果及可重复性。此试剂可将转染效率提升数倍,并可改善细胞活性,广泛适用于难转染的及常见的细胞类型(例如RAW264.7细胞和THP-1细胞)。

     

    1、有效转染难于转染的细胞


    Advanced DNA RNA Transfection Reagent转染试剂专门针对难转染的细胞种类进行了优化,能够为广泛的细胞种类提供突出的转染性能。即使是在原代细胞和干细胞等难转细胞中,也能实现高效转染。

     

    2、助力癌症研究

     

    使用与癌症相关的细胞系得到与您研究的问题相关的答案。凭借更广的适用细胞类型、更高的转染效率,Advanced DNA RNA Transfection Reagent转染试剂让您能够灵活选择研究所用的细胞系。

     

    3、在低毒条件下获得优异的转染效率

     

    Advanced DNA RNA Transfection Reagent的多肽小分子用量在很宽的动态范围内均能保持很高的转染效率,可按需进行简便快速的条件优化。在需要将细胞损伤降到至低的相关应用中。

     

    4、在新型基因组编辑的相关应用中获得高转染效率

     

    Advanced DNA RNA Transfection Reagent适用于新型基因组编辑的相关应用。通过高效率的转染,它能够增加TALEN或CRISPR系统剪切和重组的成功概率,最终使得基因修饰的效率实现,并简化后续处理步骤。



    与传统脂质体转染试剂的效果比较: 

    细胞转染总是失败?一文教你如何做好细胞转染实验

     

     

    以上说了这么多,也给大家安利了一些实用的产品,相信大家对于如何提高细胞转染效率也更加有了信心。

     

     

     

     

     

     

     

     

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