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    您的细胞养得好吗?怎样才能养好呢?

    发布时间: 2021-11-29  点击次数: 487次

    细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了。您的细胞养的好吗?您对细胞培养体系了解吗?培养基对细胞培养影响大吗?……

    细胞培养,蕴含着大学问。有时候细胞状态不好,转染 、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起。



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    培养基

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    细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同,英文都是medium。当它是粉剂时,倾向性地称为培养基,而将粉剂配成液体后,多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。

    经典的培养基有很多种,Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma、Procell(普诺赛)等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用*泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。


    培养基种类及介绍(部分)

    MEM

    是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。

    DMEM

    Dulbecco改良的BEM(DMEM )培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。

    RPMI 1640

    是专为淋巴细胞培养 而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。


    MEMα

    含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

    Ham’s F12

    是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM 等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

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    以前经常听到有人问,这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或Procell的细胞库,那很简单,问供应商就行了。或者找到相关的文献,作为参考。

    但如果你是着手建立一种全新细胞的培养体系,根本找不到任何参考,那你就得花点时间自己试验了。万事开头难嘛。因为没有一个标准答案。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首先选MEM做贴壁细胞培养、RPMI 1640做悬浮细胞培养会是一个好的开始。你也可以购买几种培养基来,然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验,来选择其中较为适合的。有时候你会惊讶地发现你的最佳培养条件与文献报道的不同,就算是同一种培养条件,细胞的生长状态也时好时坏,这是很正常的。因为试剂、水、不同批号的血清之间都存在着差异。要提高培养基的稳定性,可以从培养基和血清两方面入手。

    以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。如果使用液体培养基,这种人为的误差会减少,因为毕竟是大批量工业化生产的,批间差会很小。比干粉培养基贵不了多少,而且还帮你省了过滤器和时间。


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    血清

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    血清含有生长因子可促进细胞的繁殖,含有附着因子可促进细胞的贴壁,同时还具有抗胰酶活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。较为常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早,营养物质越丰富,所含抗体也越少,因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。由于疯牛病的原因,到目前为止,我国政府仍然禁止从北美洲、欧洲和日本等地区进口牛血清,因此市面上的牛血清大多来自澳洲、南美洲,或是国产的。安培生物目前有代理ZETA LIFE系列澳洲、南美、法国等地来源的进口胎牛血清。

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    温馨提示:购买血清请不要盲目看品牌,一定要认真识别是否是正品!


    而血清批次间的差别就是不可避免的,这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等,而且与取血动物的来源关系密切。不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。在需要更换时,也要尽量保持与原有的一批血清相似。




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