销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 如何养好SH-SY5Y细胞?

    如何养好SH-SY5Y细胞?

    发布时间: 2021-12-03  点击次数: 230次

    SH-SY5Y细胞于1970年构建,是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后得到的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。


    如今,SH-SY5Y细胞已经是科学研究中较为常用的细胞系之一了。


    但很多人在养SH-SY5Y细胞的过程中,总会遇到各种问题。今天,小编来为大家一一解答。


    SH-SY5Y细胞基本信息


    细胞名称

    SH-SY5Y  (人神经母细胞瘤细胞)

    细胞别称

    SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y;

    SK-SH-SY5Y; SY5Y

    种属及来源

    人(女性,4岁)

    脑神经母细胞瘤,转移部位骨髓

    生长特性

    半贴半悬

    生长形态

    上皮细胞样

    生长培养基

    MEM/F12+15% FBS+1% P/S

    培养环境

    气相:95%空气,5%CO2   温度:37℃

    推荐传代比例

    1:3-1:4

    推荐换液频率

    48小时/次

    冻存液配方

    55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO


    SH-SY5Y细胞培养常见问题及解决方案


    01

    收货篇


    常温运输过程中,细胞不免受到震荡和温度变化的影响,出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。

    遇到这种情况,不用紧张,只要正确处理,细胞就能恢复正常生长。


    收货时皱缩

    常温细胞收货后,把细胞放进培养箱静置2-4小时即可。


    如果4小时后细胞仍然没有铺展开,密度适中的前提下可以放培养箱中静置过夜(过夜前倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松


    收货时聚团

    常温细胞收货后,先把细胞放进培养箱静置2-4小时以稳定状态,再进行传代。


    传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。


    收货时脱落

    常温细胞收货后,先把细胞放进培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。


    脱落后的细胞通常聚团漂浮,通过离心将漂浮的细胞团收集起来,在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。


    贴壁细胞常规方法消化下来,和处理好的脱落细胞合并,混匀后铺板。


    收货脱落处理步骤

    ① 1200rpm(约250g)3min离心收集细胞,去除旧培养基;

    ② PBS 重悬细胞,再次 1200rpm(约250g)3min离心,去除PBS;

    ③ 加入 1mL 左右 0.25%胰酶重悬细胞,吹打1-2下吹起沉淀即可; 

    ④ 放入培养箱约 1-3min;

    ⑤ 用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散;

    ⑥ 迅速加入 3-5mL 含血清的培养基混匀以终止消化;

    ⑦ 1200rpm(约250g)3min离心,去除胰酶;

    ⑧ 加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中。


    图片

    ▲ 收货时皱缩、脱落

    图片

    ▲ 处理后第三天


    02

    培养篇


    SH-SY5Y细胞生长较缓慢。在培养过程中,有以下几点需要注意。


    能否使用DMEM/F12

    MEM/F12和DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y,并且都有相应的文献支持。但这两种培养基培养出来的形态会有细微差异。


    另外,使用品质好的胎牛血清将极大改善细胞生长状态


    培养基容易变黄

    因其神经母细胞瘤的特性,SH-SY5Y细胞成簇生长,饱和密度大。


    有时显微镜下看着密度不高,但细胞簇实际密度大,所以培养基很快就变黄了。这时候,需及时换液。


    生长异常缓慢

    当细胞培养一周都无法传代时,可以将细胞消化下来,接种到更小的容器中,人为增加细胞密度,从而促进细胞生长。


    平时传代时也要注意接种密度不能太低。


    传代注意事项

    不建议连续消化细胞,连续消化细胞会导致细胞状态变差。


    传代时消化时间不宜过长,通常1-3min即可,若细胞解离太快可适当用PBS稀释胰酶。


    吹打细胞时,动作轻缓一些,减少对细胞的物理刺激。


    图片

    ▲ SH-SY5Y正常生长照片


    03

    形态篇


    SH-SY5Y细胞培养时,贴壁细胞和悬浮细胞同时存在,贴壁细胞呈上皮样,有短触角延伸出来,倾向于成簇生长,容易成团。


    悬浮细胞过多

    有文献报道,SH-SY5Y在悬浮状态也能维持生长。


    SH-SY5Y生长时,大部分为贴壁细胞,少量为悬浮细胞。 如果SH-SY5Y出现大量悬浮的细胞,就需要引起注意了。


    处理办法

    ▶ 换液时将悬浮细胞离心收集,新鲜培养基重悬后接种回原瓶/原皿。

    ▶ 当贴壁细胞生长状态良好、密度适中时,可以舍弃悬浮细胞。


    成团严重

    另外,SH-SY5Y细胞非常敏感,在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。


    一个视野下,有少量成团现象,无需特殊处理。成团严重,几乎没有铺展开的细胞并且培养数天未展开时,就需要按以下方法特殊处理一下了。


    图片

    ▲ 成团较严重的SH-SY5Y细胞


    处理办法

    方法一: 低密度接种,用胰蛋白酶消化细胞(不超过5min),按1:6比例传代接种,并换新的培养器皿。延长换液时间,3天换液一次,防止细胞脱落。

    方法二: 使用多聚赖氨酸包被的培养器皿,以加快细胞贴壁速度,降低细胞聚集成团的几率。

    方法三 重新铺板,并更换新配制的培养基,并加大血清比例(不超过20%)。

    方法四:接种时,减少培养基量(如T25加3mL)以加快细胞贴壁速度,等待细胞贴壁后(约8-12小时),再补加培养基。


    预防成团的方法

    ▶ 控制细胞密度不超过80%,当密度到达或超过80%及时传代;传代时切勿暴力吹打,避免对细胞造成机械刺激。

    ▶ 使用质量好的培养基和胎牛血清,减少内毒素等有害物质对细胞的刺激。

    ▶ 请勿频繁把细胞从培养箱拿出,气温低时需开暖气维持细胞房温度;使用PBS、培养基前37度预热,以避免温差对细胞造成刺激。


    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯



    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、独特的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]