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    细胞培养常见问题及解答(二)

    发布时间: 2021-12-09  点击次数: 507次

    接上一期,本期我们继续分享细胞培养常见的问题吧~


    12. 附着性细胞继代时所使用的trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?

    一般使用的trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53 mM EDTA Na4。 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于-20 ℃,避免反复冷冻解冻造成trypsin 的活性降低,并可减少污染的机会。

     



    13. 欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

    回收动物细胞,其离心速率一般为300xg (约1 000 rpm),5-10 分钟,过高的转速,将造成细胞死亡。

     



    14. 细胞冷冻培养基的成份为何?

    动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90-95% 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO 直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。

     



    15. DMSO 的等级和无菌过滤的方式为何?

    冷冻保存使用的DMSO 等级,必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本身即为无菌状况,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4℃,避免反复冷冻解冻造成DMSO 的裂解而释出有害物质,并可减少污染的机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO 的Nylon 材质滤膜。

     



    16. 冷冻保存细胞的方法?

    冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20℃ 30 分钟*) → -80℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

    冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3 ℃至-80℃以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤,接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微 降低一些。

     



    17. 细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

    冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial,融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。 

     



    18.培养基中是否须添加抗生素? 

    除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

     



    19. 应如何避免细胞污染?

    细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格的无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。当然,适当添加抗生素也是防止细胞污染的途径。


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    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


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