销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 细胞培养常见问题及解答(三)

    细胞培养常见问题及解答(三)

    发布时间: 2021-12-09  点击次数: 245次

    本期分享第三期的细胞培养常见问题的内容,希望对大家有所帮助啦~


    20. 如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?

    原则上:直接灭菌后丢弃之。

    当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。

    高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

    (1)  在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

    (2)  分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    (3)  每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

    (4)  确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。

    (5)  在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

    (6)  重复步骤4。

    (7)  在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。

     



    21. 支原体(mycoplasma) 污染的细胞, 是否能以肉眼观察出异状?

    不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。

     



    22. 支原体污染会对细胞培养有何影响?

    支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数,代谢及研究的任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果的数据方有意义。

     



    23. 侦测出细胞株有支原体污染时, 该如何处理?

    直接灭菌后丢弃,以避免污染其它细胞株,但是如果您的样本珍贵,建议您使用支原体去除试剂去除污染



    24. CO2 培养箱的水盘如何保持清洁?

    定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

     



    25. 为何培养基保存于4℃ 冰箱中, 颜色会偏暗红色,且pH值会越来越偏碱性?

    培养基保存于4℃冰箱中,培养基内的CO2会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中的酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果,将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时,可以通入无菌过滤的CO2,以调整pH 值。

     



    26. 各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?

    不同厂牌的dish 或flask,其所coating 的polymer 不同,制造程序亦不同,虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同的dish 或flask 而有显著的生长差异。

     



    27. 购买的细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少的情形?

    研究人员在冷冻细胞的培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

     



    28. 购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

    研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于-80℃太久。

     



    29. 如何避免沉淀物的产生?

    我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

    (1)  解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。

    (2)  解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

    (3)  请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

    (4)  血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

    (5)  若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

     



    30.  L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?

    L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。

     



    31.  GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?

    GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。

    GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121℃灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。

     



    32. 什么培养基中可以省去加酚红?

    酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,不用加。


    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎关注安培生物科技有限公司了解更多技术与产品资讯。


    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、独特的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]