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    认识黑胶虫的真面目(上)

    发布时间: 2022-01-04  点击次数: 861次

    江湖上流传很久的黑胶虫,到底真实身份是啥?

    今天让我们一起来扒一扒~


    我们收集了全国29个黑胶虫污染样本进行DNA提取、测序、数据库比对,得到了鉴定结果,一起和大家分享一下吧。



    表:黑胶虫检定

    微生物种属样本数
    G+/G-形状
    直径大小
    Mycoplasma  hyorhinis
    (猪鼻支原体)
    3//0.15~0.3 μm
    Mycoplasma bovis
    (牛支原体)
    1//0.15~0.3 μm
    Mycoplasma pulmonis
    (鼠肺支原体株)
    1
    //0.15~0.3 μm
    Mycoplasma yeatsii
    (山羊支原体)
    6
    //0.15~0.3 μm
    Actinobacterium sp.
    (放线菌属)
    1G+丝状宽度近于杆状细菌,直径0.5~1 μm
    Ralstonia sp.
    (罗尔斯通菌属)
    1G-杆状1.2×2.5~3.5 μm
    Brevundimonas sp.
    (短波单胞菌属)
    1G-杆状0.4~0.5×1-2 μm
    Blastomonas natatoria
    (泳池芽殖单胞菌)
    1G-卵圆形或杆状/
    Pseudomonas sp.
    (假单胞菌)
    1
    G-杆状(0.5~1)×(1.5~4) μm
    Sphingobium sp.
    (鞘脂菌属)
    1G-杆状/
    Sphingomonas sp.
    (鞘氨醇单胞菌)
    5
    G-杆状0.3~0.8×1.0~2.7 μm
    Methylobacillus sp.
    (甲基菌属)
    1G-杆状0.8~1.0×1.0~8.0 μm
    Microbacterium sp.
    (微杆菌属)
    2G+杆状1~10×0.2~0.6 μm
    Herbaspirillumhuttiense
    (赫氏草螺菌)
    4G-螺旋型长度至数十微米;螺旋波长为5~15 μm,螺旋幅度约一乃至数微米


    如上表格所示:在这29个样本中,有11个样本鉴定为支原体,种类分别为猪鼻支原体、牛支原体、鼠肺支原体、山羊支原体。18个样本鉴定为细菌,种类分别为放线菌属、罗尔斯通菌属、短波单胞菌属、泳池芽殖单胞菌、假单胞菌、鞘氨醇单胞菌、甲基菌属、微杆菌属、赫氏草罗菌。



    支原体污染 


    本次实验中,有11个样本鉴定为支原体污染。首先,我们先来了解一下支原体的基本特征。

    逍鹏生物实验室在做沉降菌检测的时候,竟然出乎意外地培养出了一株支原体。支原体集落呈“荷包蛋样":圆形,核心部分较厚,向下长入培养基,周边为一层薄的透明颗粒区。

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    图1. 支原体菌落

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    图2. 电镜下的支原体

    图源网络,仅供参考学习用


    在电子显微镜下,支原体大小为0.15~0.3 μm,无细胞壁,不能维持固定的形态而呈现多形性,呈球形、球杆形、长丝状及分支状等。


    猪鼻支原体  


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    图3. 固体培养基上的猪鼻支原体集落

    图源网络,仅供参考学习用


    鉴定结果:样本1,6,15 为 Mycoplasma hyorhinis(猪鼻支原体)

    大小:0.15~0.3 μm

    感染宿主:其感染猪的上呼吸系统的上皮细胞,通过口鼻途径传播。小猪可以被母猪或它们的同伴(无症状携带者)感染

    污染细胞途径:推测胰蛋白酶主要是从猪的胰脏提取,纯化获得的结晶,再制成的冻干制剂,过滤除菌不当的胰酶溶液可能携带猪鼻支原体,建议大家买品牌胰酶,降低污染风险


    鼠肺支原体  


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    图4. 固体培养基上的鼠肺支原体株

    图源网络,仅供参考学习用


    鉴定结果:样本12 为 Mycoplasma pulmonis(鼠肺支原体)

    大小:0.15~0.3 μm

    感染宿主:大鼠和小鼠是主要的宿主。寄生于呼吸道上皮顶膜,附着感染从鼻前通道到肺泡的任何地方,可能是由表面糖蛋白介导的

    污染细胞途径:在提取鼠源的细胞,例如鼠巨噬细胞,鼠肺动脉上皮细胞,鼠原代海马神经元时,如果提取的鼠带有鼠肺支原体,就有可能会引入污染


    牛支原体  


    图片

    图5. 固体培养基上的牛支原体株

    图源网络,仅供参考学习用


    鉴定结果:样本28 为 Mycoplasma bovis(牛支原体)

    大小:0.15~0.3 μm

    感染宿主:主要寄生于牛体内,感染部位广泛,感染牛的呼吸道,会引起肺炎、中耳炎、关节炎、结膜炎

    污染细胞途径:推测细胞增殖的主要营养之一就是胎牛血清。胎牛血清来源于动物,其主要通过0.1μm滤膜过滤除菌。如果血源及过滤除菌不当,就会给细胞带来潜在的支原体污染,因此建议大家购买品牌的胎牛血清

    山羊支原体  //


    图片

    图6. 固体培养基上的山羊支原体株

    图源网络,仅供参考学习用


    鉴定结果:样本9,10,17,18,19,20 为Mycoplasma yeatsii(山羊支原体)

    大小:0.15~0.3 μm

    感染宿主:主要寄生于山羊体内,感染部位广泛,寄生于羊的外耳道,咽后淋巴结、肺、脾

    污染细胞途径:此类污染来源异常诡异,因为大家平时培养的细胞来源或营养体系,很难接触到此类污染的环节,故很难推测到污染源头。若培养相关的细胞或者使用相关的营养体系,就比较容易推测污染来源了


    //  小结  //

    如果黑胶虫的真实身份是支原体,那么支原体本身不会游动,不符合黑胶虫污染活跃游动或原地打转、颤动的特征,故推测可能细胞本身存在潜在的支原体污染,刚好被检测出来了。


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    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


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