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    BV2细胞异常生长形态解析及解决方案

    发布时间: 2022-01-06  点击次数: 967次

    BV2

    常用的小胶质细胞模型,它用携带v-raf/v-myc基因的逆转录病毒(J2)感染原代小胶质细胞而获得永生化。BV2细胞表达非特异性酯酶活性,它具有吞噬性能力,并缺乏过氧化物酶活性。这种细胞不仅会分泌溶菌酶,在适当的刺激下,还会分泌白细胞介素1和肿瘤坏死因子。


    此外,BV2细胞还表现出自发的抗念珠菌活性,用干扰素-Y处理后获得杀肿瘤活性。



    从表型上看,BV2细胞对MAC1和MAC2抗原呈阳性,而对MAC3、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖核苷(GC)抗原呈阴性[1]。

    图片

    图A. BV2细胞显微照片,bar=30 μm.

    图B. 通过扫描电镜观察,在玻璃盖板上培养的BV2细胞,bar=5 μm.

    图C. 通过透射电镜观察,BV2细胞的部分细胞质吞噬iCA,bar=3 μm.

    (图片引用自文献[1]


    在培养BV2细胞的时候,同学们最常遇到的问题就是生长形态异常。生长形态异常往往伴随着细胞生长缓慢、细胞死亡等,导致实验做不出结果,给大家带来重重困扰。


    小普根据多年的实验经验,为大家整理了这一现象可能发生的原因,及相应解决方案。


    首先我们来看看正常的BV2形态。结合众多文献和Procell的细胞图片来看,BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。


    悬浮细胞为圆形,贴壁细胞既有圆形也有梭形。由于圆形细胞折光率高,它的边缘看起来是发亮的;梭形细胞则向两端伸出黑色突起。

    图片

    (图片源自Procell)


    那么,异常生长的BV2细胞有哪些形态呢?


    如何根据不同的异常生长形态,调整改善培养条件,及时解决问题?


    小普总结如下:


    图片

    形态1:细胞全部飘起,完全不贴壁

    解析:分为培养基偏碱及复苏后不贴壁两种情况。

    (1)培养基偏碱培养瓶不透气或者开封时间过长,培养基PH将增大,可见培养基呈紫红色。BV2对培养基酸碱度较为敏感,在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。

    解决方案:给细胞上新鲜配制的培养基,并使用透气瓶。

    (2)复苏后不贴壁。需要检查冻存或复苏操作过程,以及培养基是否存在问题。

    解决方案:确保冻存前状态良好及冻存复苏操作规范,使用新鲜配制的培养基,即可解决问题。


    图片

    形态2:细胞形态变为阿米巴样

    解析:小胶质细胞是一种可塑性*的细胞,可通过特定因素激活,从而发挥其免疫功能。从静息态变为激活态的过程中,小胶质细胞形态也随之发生改变。


    实验中常用细菌脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFNγ),分别模拟细菌和病毒感染,来刺激小胶质细胞激活。受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样(如下图所示)。


    但有的时候BV2形态变化并不明显,还需要结合其他实验,如检测NO、IL-13等炎症因子的表达,来确定BV2是否被定向激活。

    图片

    (图片引用自文献[2]


    如果细胞没有受到任何刺激,就已经呈现阿米巴样,或者受刺激后,炎症因子表达没有差异,那么细胞有可能发生了自分化。


    其原因可以从以下几点考虑:

    (1)存在潜在微生物污染,刺激细胞自分化。

    解决方案:通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型,并排查污染源头。

    (2)使用的胎牛血清内毒素高,内毒素刺激细胞自分化。

    解决方案:尝试使用超低内毒素胎牛血清,或许能得到改善。


    图片

    形态3:全都是分枝状细胞,圆形细胞少

    解析:这种形态往往伴随着细胞生长慢或生长停滞的情况。由于圆形细胞增殖速度较快,在圆形细胞缺失的状况下,整体增殖速度就会减慢。

    解决方案:由于BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,贴壁和悬浮细胞的比例并不固定,当悬浮细胞较多时,换液和传代时要将悬浮细胞收集,避免圆形细胞的大量损失。


    总而言之,BV2细胞的形态、生长状态与其生长环境息息相关,给细胞以最合适的环境,严格按照要求规范操作,细胞也将用好的状态回报你。


    参考文献:

    [1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.

    Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.

    Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.

    J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)

    [2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.

    Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.

    Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells. 



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