销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > Biozellen基质胶在细胞侵袭实验的操作方法

    Biozellen基质胶在细胞侵袭实验的操作方法

    发布时间: 2022-03-22  点击次数: 162次

    细胞侵袭实验准备程序

    A、试剂准备:

    1、C 缓冲溶液 (0.5 X) 制备 : 使用 37 ℃水浴回温的无血清细胞培养液 (例如: 无血清 DMEM 等,用于稀释 A 胶) 稀释 C 缓冲溶液 (10 X) (货号: B-P-00002-C)至 C 缓冲溶液 (0.5 X), 即体积稀释 20 倍。使用前放置 37 度水浴槽。

    (例如:1 mL C 缓冲溶液 (10 X) + 19 ml 无血清 DMEM; 如未使用完毕,可保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周)

    2、A 胶 (1X) 制备 : 将 A 胶 (2X) (货号: B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回温 10 分钟,确认完全溶解。再将 37 ℃水浴回温的无血清细胞培养液取 0.5 mL,加至 37 ℃已溶解的 0.5 mL A 胶 (2X),配置成 1 mL 的 A 胶 (1X)。使用前置于 37 度,可降低 A 胶黏度。

    (单次使用,勿重复冷冻解冻 A 胶 (1X) )

    B、细胞侵袭实验步骤

    1、准备适用 24 孔板的 Transwell 装置(例如:康宁 Transwell insert, 8 μm PET membrane)。

    2、 37 ℃已回温的 C 缓冲溶液 (0.5 X)将 A 胶 (1X) 原液体积稀释 5-20 倍,建议一开始可选用 15 倍。

    (根据细胞种类做稀释比例对比实验,找出最为适合自己实验体系的稀释倍数,稀释倍数越高,胶体越软,越容易穿透)

    3、根据 Transwell 上室底部面积加入步骤 2 的 0.1 mL 稀释后的 A 胶稀释液到 Transwell 上室中。

    4、将步骤 4 在 4 ℃ 冰箱孵育 2-3 小时。

    5、 Transwell 上室中加入 0.1 mL 无血清的细胞悬液,使细胞最终浓度约 7.5 x 10^4 cells/well.。

    6、 Transwell 下室中加入 0.8 mL 含 10 %血清的细胞培养液做为 chemoattractant,吸引细胞进行迁移及分泌基质蛋白酶 (MMP) 侵袭。

    (对照组为 Transwell 下室中加入含 0.8ml 无血清的细胞培养液)。

    7、将细胞培养板在 37 ℃, 5 % CO2 培养箱孵育 24-48 小时。

    8、移除培养液,以 PBS 清洗 2 次。

    9、用棉签轻轻擦掉上层未迁移的细胞。

    10、加入 1 ml 100 % 甲醇室温固定 30 分钟,再以 PBS 清洗 2 次。

    11、加入 1 ml 0.1 % 结晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 结晶紫) 室温染色 20 分钟,再以 PBS 清洗 2 次。

    12、 Transwell 移至载玻片上,在显微镜下随机 6-9 个视野观察计算迁移的细胞数。


     

    Biozellen植物源材料基质胶编辑

     

    货号: B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

    规格: 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

    保存条件:4℃保存、 保存两年

    产品描述

    Biozellen®3D细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液,可应用到 3D 细胞培养与微环境应用等;本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试等;胶体可快速被固定液分解, 请操作前详细阅读此使用指南。

    Biozellen®3D细胞培养基质胶套装为植物来源,无动物源成分、不含酚红)

     

     

    深圳市安培生物科技有限公司是美国Biozellen公司的中国代理商。Biozellen®3D细胞/类器官培养基质胶现货供应,经验证可完全替代BD/康宁的基质胶,来源为植物源且氨基酸序列人源化,无人畜共患病的病原菌或毒素污染,提供完整售后服务和技术支持。

    安培生物科技有限公司Biozellen中国代理商)

    致力成为推动生命科学进步和值得信赖的合作者



在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]