销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 羊膜腔接种

    羊膜腔接种

    发布时间: 2022-03-25  点击次数: 427次


    羊膜腔接种主要应用于从临床材料中(如患者咽嗽液等)分离流感病毒等操作。这种接种途径可直接感染羊膜腔的内胚层,也可被鸡胚咽下或吸入,引起全胚胎感染。另外,病毒也可被排泄到尿囊腔中,使尿囊液中含有大量病毒。因此,在用羊膜腔接种分离病毒时,除可收获羊水以外,还可收获尿囊液。


    原理


    鸡胚接种技术的原理是用病毒(如牛痘病毒(vaccinia virus)和鸡新城疫病毒(Newcastle-disease virus))接种鸡胚。 牛痘病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长,经培养后,产生肉眼可见的白色痘疱样病变,似小结节或白色小片云翳状。 鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内,生长后,鸡胚全身皮肤出现出血点,以脑后zui显著。 鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的 动物病毒 的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,毒力的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。


    材料与仪器


    器材:


    ①孵卵箱


    ②检卵灯、照明灯、卵杯、卵盘、鸡胚开孔器


    ③注射器


    ④眼科用剪刀和摄子、酒精灯和毛细吸管


    试剂:


    ①材料:受精鸡卵最好选择健康来亨鸡受精卵,因为来亨鸡的卵壳洁白易于照视观察,如无此卵也可选择其他受精鸡卵。用于病毒培养的受精鸡胚,最好是来自无特定病原体鸡群 。


    ②消毒剂(2.5% 碘酒和 75% 酒精) 


    ③2% 来苏儿液


    步骤


    羊膜腔接种的基本过程可分为如下几步:


    ( 1 ) 接种步骤与方法


    1 ) 将 10- 12 日龄的鸡胚在检卵灯上照视,划出气室范围,并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。

     
    2 ) 用 2.5% 碘酒及 75% 酒精分别消毒气室部位的蛋壳,并用开孔器在气室顶端钻出一约 10 mmx6 mm 的长方形裂痕,注意勿钻破壳膜 。


    3) 用 2.5% 碘酒再次消毒钻孔区后,用灭菌的眼科小摄子除去长方形卵壳和外层壳膜,并滴加灭菌液状石蜡一滴于下层壳膜上使其透明,以便观察胚胎的位置。


    4) 将注射器刺向胚胎的腾下胸前,以针头拨动下颗及腿,当进入羊膜腔内时,可看到鸡胚随针头的拨动而动,此时可注入 0.1 -0.2 mL 病毒液。


    5 ) 拔出针头,孔区先用 2. 5% 碘酒消毒,然后用沾有碟酒通过火焰的小块胶布将卵壳的小窗口封住,并于 33-35 ℃ 孵卵器内孵育 48~72 小时,此过程要保待鸡胚的气室朝上 。


    (2) 解剖与收获


    1) 收获前鸡胚须置 4 ℃ 冰箱 6 小时或过夜,但不能放置时间过长(过长会引起散黄)。如急于收获亦可置-20 ℃ 冰箱 1 小时左右。预冷的目的是将鸡胚冻死,使血液凝固,避免收获时流出红细胞,并同尿囊液中的病毒发生凝集,造成病毒滴度下降。


    2) 用 2.5% 碘酒和 75% 酒精分别消毒气室处的卵壳,并用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳,此时勿使其碎片落于未损伤的壳膜上。用无菌毛细吸管吸取尿粪液,然后左手持小摄子夹起羊膜成伞状,右手用毛细吸管插入羊膜腔吸取羊水,平均每胚可收获 0.5-1.0 mJ羊水。


    3) 病毒通过胚胎机体后被排泄入尿囊腔,因此当羊水过少时,可用同胚少量尿搅液冲洗羊膜腔并吸取该洗液。


    注意事项


    1. 防止污染 为了减少污染,整个过程均需无菌操作,否则鸡胚一经污染,即迅速死亡或影响病毒的培养 。


    2. 适宜的培养温度 接种过的鸡胚,应根据实验病原繁殖所需温度,放入 33~37 °C 温箱内培养 。


    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯


    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]