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    碱裂解法质粒抽提试剂盒的原理是什么?

    发布时间: 2022-06-08  点击次数: 56次

    这次讲解碱裂解法,从大肠杆菌中抽提质粒的基本原理。


    我们将摇菌得到的混合物离心,去除培养基,就可以获得大肠杆菌,加入溶液1重悬。溶液1含缓冲成分,和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2,含NaOH和SDS。在强碱环境下,细菌的细胞壁和细胞膜被破坏,释放出基因组DNA和质粒DNA。此时基因组DNA双螺旋结构被破坏,发生变性。质粒DNA也会发生变性,但两条互补链仍会互相盘绕,并紧密的结合在一起。


    当加入溶液3(含醋酸钾溶液)使pH恢复中性时,共价闭合环状质粒DNA复性快,而线性的染色体DNA复性缓慢,细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,被十二烷基硫酸盐包盖,从溶液中有效地沉淀下来。经过离心除去变性剂后,就可以从上清中回收复性的质粒DNA。


    质粒抽提试剂盒中,通常还有 DNA吸附柱,将质粒DNA吸附,其他的杂质被洗去。最后用洗脱液,将质粒DNA洗脱下来。


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