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    夏天到了,您做好预防细胞污染了吗?

    发布时间: 2022-06-17  点击次数: 280次

    注意事项:

    夏天到了,天气炎热,空气中的温度湿度都在上升,这时最易滋生细菌等微生物,导致细胞培养过程会没有那么的顺利,总是被污染,而且微生物繁殖的速度非常快。今天我们就来说道说道细胞污染应该怎么预防、处理。


    目前细胞污染大致可分为:细菌、真菌、支原体、黑胶虫、病毒等污染。那么想要解决问题,我们就需要知道细胞是遭受了何种污染,才可对症下药。接下来我们将带领大家逐步分析这些污染。



    细 菌


    细菌污染时,培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊,有时稍加震荡,便会有很多混浊物漂起。有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异(出现多角,多核状况)、细胞不附着。


    细菌属于原核生物,比细胞小很多,在显微镜下或成黑色细沙状,或背景有大量黑点。可能造成细胞增殖缓慢或形态上的改变(多角、多核等),细胞质中产生空泡、细胞不附着。


    如遇细菌污染,我们可以如何处理呢?

    合理使用相应抗生素可杀灭细菌:

    抗生素作用对象使用比例储存条件
    卡那霉素溶液细菌(如G+、G-)、支原体稀释:1:100-20ºC
    硫酸庆大霉素溶液细菌(如G+、G-)、支原体稀释: 1:1000AMB室温(15-30℃)
    青链双抗细菌(如G+、G-)稀释: 1:100-20ºC
    青链双抗,10浓缩液细菌(如G+、G-)稀释: 1:1000-20ºC
    青链霉素,制霉菌素三抗细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释: 1:100-20ºC
    青链霉素,两性霉素素B三抗细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释: 1:100-20ºC
    青链霉素,新霉素三抗细菌(如G+、G-)稀释: 1:100-20ºC



    真 菌


    真菌指的是类似棉絮状的漂浮物,真菌是真核生物,比细胞大。在显微镜下可观察到菌丝体,真菌有菌丝体,呈丝状、管状、树状、串珠状。真菌一般呈菌落聚集生长。污染早期不会使培养基变黄。


    细胞被真菌污染后,仍可生长,长时间细胞的活力状态会变差,梅雨季时的污染率会提高。


    真菌的种类也比较多:酵母菌、念珠菌、霉菌(青霉菌、根霉菌、曲霉)、蕈菌等。这些菌类都有各自的特点,很容易区分。



    酵母菌:成串的卵状物,体积为细胞的1/5~1/10倍,可由出芽生殖时的一大一小连体结构识别,污染严重时会造成培养基pH值改变,不易去除。


    念珠菌:卵圆状,在细胞周边生长。

    霉菌:霉菌在我们的生活中无处不在,它比较青睐于温暖潮湿的环境,一有合适的环境就会大量的繁殖,有绿色,毛茸茸的青霉菌,还有像树根一样根霉菌。


    如果发现真菌污染,我们如何进行处理呢?

    合理使用相对应的抗生素,可有效杀灭真菌污染:





    抗生素作用对象使用比例储存条件
    两性霉素素B真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释:1:1000 ~ 1: 10,000-20ºC
    制霉菌素真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释:1:100 ~ 1:1000-20ºC
    青链霉素,制霉菌素三抗细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释: 1:100-20ºC
    青链霉素,两性霉素素B三抗细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀释: 1:100-20ºC



    支 原 体


    支原体常来源于实验人员(支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道)、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具,体积只有0.15~0.3μm,所以能通过一般培养基0.2μm过滤膜进入培养基体系,培养基不会变黄,所以污染时不容易用常规方法发现,光学显微镜难以辨识。






    支原体革兰染色为阴性,大部分支原体繁殖速度比细菌慢,对青霉素类的抗生素不敏感。污染不但会缓慢的改变细胞形态(拉丝、铺展)、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应,它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR或Western Blot结果偏差。


    方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:


    1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培养基中,保持受污染的细胞在混合液中培养4天,期间可用含 BIOMYC-1 的新培养基对细胞进行传代;

    2. 4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培养基中,并维持培养3天,期间可进行传代。

    3. 以上是一个处理周期,必要时可继续 2-3 次处理周期。

    4. 每过一个周期,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。


    方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:

    1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培养基中;

    2. 持续培养14天,期间可进行传代;

    3. 以上是一个处理周期,必要时可继续 2-3 次处理周期。

    4. 每过一个周期,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。



    提 示


    支原体杀除试剂对实验几乎没有影响,可进行细胞实验;如果客户使用其中一种方案,不能清除支原体,说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内;最佳方案是先用方案一处理一周期,再用方案二处理一周期,然后做支原体检测。



    黑 胶 虫


    目前科学界对黑胶虫并无定论,认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。


    黑胶虫不是一个新的物种,是大家对显微镜下会活跃游动或原代打转、颤动的未经测序鉴定的微生物的别称。因为多呈黑点的游动,被大家称为“黑胶虫"。实际上,它不是虫子,经过我们对多个客户提供的黑胶虫样本测序,发现实际上它是各种细菌。大多数细菌都有鞭毛,这也就不难理解,它为啥会像虫子一样游动或原地打转,颤动。



    在高倍率显微镜头下,可观察到各式形状的小黑点(卵圆状、球状、杆状等)、活跃的布朗运动及明显游动现象。

    复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染,并且与细胞呈现此消彼长的现象,部分黑胶虫具有细胞毒性,可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡,培养基不浑浊。



    方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:


    1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培养基中,保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少许的新培养基;

    2. 4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培养基中,并维持培养 3 天;

    3. 以上是一个处理周期,必要时可继续 2-3 次如上处理循环。 


    方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:

    1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培养基中;

    2. 持续培养14天,期间每2-3天更换一次培养基;

    3. 以上是一个处理周期,必要时可继续 2-3 次如上处理循环。

    4. 在处理过程中,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。 



    以上污染与实验室环境,温度湿度等都有较大的关系,因此细胞房我们也需要提前做好预防。




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