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    细胞污染如何识别?

    发布时间: 2022-11-01  点击次数: 228次

    在培养细胞过程中,同学们最担心的就是细胞污染。因此,今天给大家分享如何辨别细胞污染的经验,赶快学起来吧~


    一、肉眼观察

    把培养瓶或培养皿拿起来,对者光线检查

    ●浑浊情况:即使细胞密度很高,培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶,观察培养基的浑浊或悬浮情况,一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。

    ●培养基颜色的变化。酸性条件下,加了酚红的培养基会由红变黄,而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色,真菌污染会使培养基变成深紫红色。

    注意:丢掉细胞以前要仔细检查一下,快速生长和生长过量的细胞培养基也会变黄。当培养箱中CO2的浓度变化时培养基的颜色也会变成黄色(CO2浓度太高)或是粉红色(CO2 浓度太低)。

    ●闻!当然不能打开瓶子去闻,把鼻子贴在瓶口闻,许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味,甚至打开培养箱门就闻到了。


    二、显微观察

    在倒置显微镜下,先用低倍(10x)再用高倍(40x)物镜(总放大倍数为400)观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞:

    ●其他有机体:在低倍镜下,真菌的菌丝体成长棒状,并横穿整个视野,还可以观察到酵母,有时呈小圆球形,有时还有芽。

    在高倍镜下可以观察到细菌,它们可能是棒状或球状,单独成链或成团存在,它们也可能和细胞混在一起,并且明显处于细胞内部,有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染(当然也算被污染了!),而且可能污染物是可以运动的。

    ●损伤细胞:感染会杀死细胞,可能导致每个细胞都裂解/细胞层从附着物上全剥离,更可能的是细胞变得不规则(或大或小),在低倍镜下是黑色的粒状。

    (1)悬浮细胞

    悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察,尤其是高倍显微镜下。

    ●将培养瓶或培养皿放在显微镜的载物台上,静置一会。将焦距对准器皿的底部,观察那些轻微附着的细胞,因为它们可能已经接触到了微生物。

    ●对准整个培养瓶焦距, 当发现细胞的时候,用细聚焦调节旋钮调节,仔细检查周围的培养基有没有污染发生。

    (2)贴壁细胞

    image.png



    三、制片观察法

    如果你不能确定是否发生了污染

    ●制作湿涂片或染色片:取1 ml培养基离心,用50μl培养基或缓冲液重新悬浮细胞,滴一滴到载玻片,盖上盖玻片制成湿涂片;或涂片、固定并染色(甲基兰或革兰氏染液),在高倍镜下观察。

    ●将细胞在营养培养基或血琼脂培养基上划线,37℃培养3天。如果有菌落,那么细胞被污染了。

    ●取1 ml的细胞培养液至无菌的微量离心管中,37℃培养3天。观察到浑浊物,做湿涂片显微镜观察。


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