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    分离鸡胚背根神经节

    发布时间: 2022-12-02  点击次数: 241次

    材料与仪器

    酶溶液 DRG
    离心管 培养皿 解剖显微镜

    步骤

    解剖前在 15 ml 离心管中配制酶溶液,置 37℃ 水浴特用。

    2. 解剖胚胎,解剖全过程保持组织湿润。

    (1) 杀死胚胎,去腿,放于 100 mm 培养皿。

    (2) 用钝头剪刀沿腹中线作一切口,将皮肤向两侧卷缩至能取出内脏。

    (3) CMF-PBS 漂洗体腔。

    (4) 用细镊子或用 CMF-PBS 吹打,小心去掉脊柱上的任何黏附组织。

    3. 在解剖显微镜下,用细镊子从脊髓上细心撕下脊膜。取出交感神经节,即 DRG 上脊髓两侧的细条带。

    4. 用微簧剪刀从神经干上剪下神经节,用细镊子从脊髓上摘下 DRG,放于盛有 1 ml CMF-PBS 的 35 mm 培养皿。

    5. 分离适量 DRG,确保无任何黏附组织或神经干,时间以不超过 45 分钟为宜。

    6. 在预热的酶溶液中加 1 ml 含 DRG 的 CMF-PBS。37℃ 水浴孵育 8 或 13 分钟,每隔 3 分钟颠倒一次管子。

    7. 加入 1 ml FBS 终止酶反应,沉淀 DRG。CMF-PBS 清洗 DRG,再沉淀。

    8. DRG 悬于 1 ml 补给了 NGF 的完培(37℃)。用尖-端内径烧至一半的巴斯德吸管轻轻吹散细胞(6 次)。如果仍有组织块残留,使其沉降,细胞悬液转移至另一支 15 ml 无菌离心管。重复吹散残留组织块,两次样品混合。

    9. 计数分散细胞,根据需要以合适密度接种。

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