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    免疫细胞传代后多久适合进行转染?

    发布时间: 2023-02-06  点击次数: 665次
       理想免疫细胞转染方法应具有效率高、细胞毒性小、重复性好、安全、简单等优点。病毒介导的转染技术是目前转染效率高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。
      常见实验室细胞传代方法有贴壁细胞用消化法传代和悬浮生长的细胞采用离心分离后传代。贴壁细胞消化时,因细胞对胰酶的敏感程度不同,所以消化时间差别较大。对于初学者,消化程度也很难掌握好,加入适量胰酶,轻轻摇晃3-4次(使细胞充分与胰酶接触),随即吸取胰酶,放于培养箱消化,数分钟后取出,轻拍培养瓶,见细胞自瓶壁滑下即可,若没有则继续消化。
      细胞转染是指取对数生长的细胞,接种于培养板,加培养液,培养过夜(细胞长至85-90%满);按说明书进行转染实验。转染时应注意预备脂质体/DNA混合物必须在无血清下进行。在转染之前更换培养基,可提高转染效率,但所用培养基必须37℃预温。脂质体/DNA混合物应当逐滴加入,尽可能保持一致,从培养皿一边到另一边,边加入边轻摇培养皿,以确保均匀分布和避免局部高浓度。
      对于细胞转染,一般在细胞中期转染,转染效率会相对高一些。这个时候的细胞状态是的。对于转染的佳时间是在传代后24hr以内。转染后48hr,外源基因肯定是有表达的。至于72hr,应该也还是有表达的,可能表达量会很低,主要是这个时间点的细胞大部分都衰老了。建议293T收集细胞,在转染后36-48hr收集。
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