销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 单链 cDNA 的合成

    单链 cDNA 的合成

    发布时间: 2023-04-21  点击次数: 750次

    材料与仪器

    步骤

    一、材料

    1. 缓冲液、溶液和试剂

    去除 RNA 酶的双蒸水

    10XRT-PCR 缓冲液(去除 RNA 酶的双蒸水,100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)

    2. 酶和酶缓冲液

    MMLV 逆转录酶(100~200U/ul)

    SUPERaseINRNA 酶抑制剂(20U/ul;Ambion)

    3. 核酸和寡核苷酸

    dNTP 混合物(10 mmol/L,包含所有四种 dNTP)

    随机引物(5umol/L)

    总 RNA(达到 2.5ug)

    4. 实验器材

    薄壁的 PCR 管

    二、方法

    1. 在冰上加 2ul50umol/L 的随机引物到薄壁的 PCR 管中(一个反应一管)。

    2. 加入 2.5ug 的总 RNA。

    3. 加入 4ul 的 10 mmol/LdNTP 混合物。

    4. 添加去除 RNA 酶的双蒸水(RNaSe-freeH20),使体积达到 16ul。

    5.70°C 加热 10min, 变性二级结构,然后立即放在冰上。

    6. 加 2ul 的 10XRT-PCR 缓冲液。

    7. 加1ul 的 20U/ulSUPERaselN。

    8. 加1ul 的 100~200U/ulMMLV 逆转录酶。

    9.42°C 温浴 1h。

    10.95°C 加热10min, 灭活逆转录酶。

    11. 继续扩增步骤或停止反应,-2°C 储存。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、壹流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东,服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,旨在为生命科学的发展提供壹流的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线,在各个领域内向用户提供世界前沿水平和质量稳定的产品,安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等优质客户提供优质的产品、技术支持与服务。


产品中心 Products