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    如何提高 RT-PCR 反应的灵敏度与特异性

    发布时间: 2023-06-30  点击次数: 774次

    1.首先确定模板 RNA 完整性好,无 DNA 污染。

    2.RNA 模板中不应含有扩增反应抑制剂。

    3.为了防止模板降解,在反应体系中加入 RNase 抑制剂 RNasin。

    4.使用适量的模板 RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。

    5.若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。

    6.设计引物时,避免在引物 3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。


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