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    ibidi 载玻片|优化活细胞培养

    发布时间: 2024-01-18  点击次数: 272次

    简介:

    免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。传统实验方法用小玻片,先泡酸、再晾干、再 coating、再种细胞、染色、封片成像。

    本文章使用新方法,我们将描述在通道载玻片内培养大鼠成纤维细胞(Rat1)的单个实验案例。然后,我们用AlexaFluor®488鬼笔环肽染色F-肌动蛋白细胞骨架,并用DAPI对细胞核进行复染。

    实验步骤:

    培养,固定,染色,成像


    培养:


    1.在无菌条件下打开ibidi μ-Slide并将其放在μ-Slide架(80003)上。将Rat1细胞悬浮液加入通道中。

    2.用提供的盖子轻轻地盖住储液器。可以部分关闭它们。


    3.将架子放入培养箱(37°C; 5%CO2)中,让细胞附着(60分钟)。然后用无细胞培养基填充两个储库。


    4.培养过夜。


    固定细胞:

    1.通过使用细胞培养抽吸装置或移液管从储库中吸出整个培养基。用Dulbecco's PBS洗涤细胞,缓慢地将液体施加到一个空的储液器中,并从对面的储液器中吸出。

    2.通过在PBS中使用3.7%多聚甲醛以相同的方法固定细胞。从通道的另一侧移除储液器的液体并等待10分钟。

    洗涤封闭:

    1.用PBS洗涤细胞。

    2.在PBS中使用0.1%Triton®X-100溶液通透3-5分钟。


    3.在PBS溶液中施加μl的1%BSA 溶液封闭20分钟。


    4.用PBS洗涤细胞


    染色镜检

    1.从通道中清除所有液体。从通道中吸出液体后,不要让通道干燥。

    2.用AlexaFluor®488鬼笔环肽(1Unit+500μl PBS+ 1%BSA,InvitrogenCorp.)在室温下培养20分钟。

    3.用PBS洗涤细胞并清空通道。


    4.施用DAPI(0.1μg/ ml,Sigma-Aldrich)3-5分钟。


    5.用PBS洗涤细胞并除去所有液体。用滴管瓶注入 Ibidi封片油。用提供的盖子盖住储液器。μ-Slide可以存储大约4周。


    6.在荧光显微镜下选择适当的滤镜,也可以使用浸油观察细胞。



    优点:

    1.高分辨率成像

      ibidi载玻片非常适合宽场荧光、共焦成像、FRAP、FRET、FLIM和相差成像。

    2.操作快速、简单

      一体式腔室简化了您的免疫荧光实验流程。

    3.经济高效的实验

      仅需少量细胞和少量试剂。

      深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、壹流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东,服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,旨在为生命科学的发展提供壹流的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线,在各个领域内向用户提供世界前沿水平和质量稳定的产品,安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等优质客户提供优质的产品、技术支持与服务。






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