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    细胞爬片免疫组化染色实验步骤

    发布时间: 2024-01-22  点击次数: 209次

    原理:

    免疫组织化学技术:检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。


    (一)组织和细胞标本的准备

    1. 组织标本的取材-取材新鲜,固定及时,形态完好。


    2. 细胞标本的准备

    (1)活体细胞标本:印片法、穿刺吸取法、沉淀法


    (2)培养细胞标本:

    细胞涂片: 将细胞制成悬液(10^6)涂在 涂有切片粘合剂的载玻片上,晾干后固定(细胞甩片)。

    ②细胞爬片: 将细胞直接培养在盖玻片上 将细胞直接培养在6孔或9孔板上。

    3.固定

    (1)保持形态:终止和抑制外源性和内源性酶活性,防止 组织细胞的死后变化,防止自溶和腐败,保持组织细胞的固有形态。

    (2)保存抗原使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原成份转变成不溶性物质,以保持它原有的结构和定位与生活时相仿。

    (3)硬化作用:固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、增加组织硬度、便于制片。

    (4)便于观察:使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折射率,造成光学差异,以便染色后易于鉴别和观察;经过固定的组织能对染料产生不同的亲和力而着色清晰,便于辨认。

    注意事项:

    ①防止脱片:玻片预处理(多聚赖氨酸)、温和操作。

    ②力求保持组织新鲜, 勿使其干燥, 尽快固定处理。

    ③组织块不易过大过厚,必须小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm,尤其是组织块厚度须保持在0.3cm 以内。

    ④固定剂必须有足够的量,在体积上一般大于组织20倍。

    ⑤组织固定后, 应充分水洗,去除固定剂,以减少固定剂造成的人为假像。

    (三)细胞爬片的免疫组化染色

    1. 取出细胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20 ∼30 分钟。

    2. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。

    3. 打孔液浸泡 5 分钟。

    4. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。

    5. 后接前述实验步骤的第 6 步(正常血清封闭)。

    注:第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原,检测细胞膜抗原时不用。

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