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    细胞培养过程中如何避免微生物污染?

    发布时间: 2024-03-20  点击次数: 137次

    细胞培养过程中常见的可造成污染的微生物包括细菌、真菌、支原体、酵母等,不论是哪种污染,均会造成细胞生长变慢、培养基浑浊、细胞变形等不利于细胞生长的现象,更有甚者可能会出现污染同细胞箱内别的细胞的现象,因此,细胞培养过程中应树立严格的无菌意识,尽量避免造成细胞污染。


    准备处理细胞前,有如下几点注意事项:

    1. 细胞培养应在细胞房内进行,同时细胞房应保证环境状况良好,空气干燥。


    2. 进入细胞房前应在缓冲间穿戴细胞房专用隔离衣、专用拖鞋,戴好一次性口罩及手套。


    3.细胞房应配置75%酒精喷壶,打开细胞培养箱前应使用75%酒精全面消毒双手,同时对细胞培养箱外侧进行消毒。

    4.细胞操作过程中所使用的耗材如枪头、Ep管、冻存管、离心管等均要求无菌,使用到的仪器如离心机、移液器、水浴锅等均为细胞房专用仪器。

    5.处理细胞等一系列操作均应在生物安全柜内进行。

    6.细胞培养箱内应加入硫酸铜溶液,防止细胞污染,同时,每天处理细胞的同时注意观察CO2罐的容量,若不足及时更换。

    开始处理细胞到结束的过程是细胞最容易出现污染的环节,因此需格外注意操作,注意事项如下:

    1.开始操作前,生物安全柜内放入需要的物品,开启紫外灯消毒30min。

    2.消毒结束后,用75%酒精浸泡的棉球或纱布擦拭台面,后面所有放入生物安全柜内的物品均需酒精喷洒消毒。

    3.对于一般的细胞来说,正常培养的过程中均应在培养基中按比例加入青霉素链霉素双抗,防止细胞出现细菌污染。

    4.在处理细胞的过程中,小心操作,移液器枪头不能碰到生物安全柜内任何物品,若有碰到应及时更换,同时,吸取不同液体时注意及时更换枪头,防止出现交叉污染。

    5.所有培养基配置完成后建议分装使用,每次实验结束后剩余培养基、胰酶等均用封口膜进行封口。

    6.处理细胞完成后,使用75%酒精浸泡的纱布仔细擦拭台面,最后开启紫外灯消毒。

    7.在所有人结束细胞实验后,细胞房内应严格消毒,将84消毒液或新洁尔灭稀释后擦拭桌面,再用专用拖把拖地,最后开启紫外灯消毒。

    细胞操作整个过程较为简单,但操作需要注意很多细节,细胞污染可能避无可避,一旦出现了细胞污染,建议尽早扔掉细胞并对培养箱进行消毒。

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