裸鼠皮下成瘤实验

裸鼠皮下成瘤实验用于研究肿瘤的形成、发展以及针对肿瘤的治疗方法。裸鼠是一种缺乏免疫系统的小鼠品种，因此能够更容易地接受移植的异种组织，比如人类肿瘤细胞。在这种实验中，通常会将人类肿瘤细胞注射到裸鼠的皮下组织中，形成肿瘤。然后观察肿瘤的生长情况、病理学特征以及对治疗方法的反应。

此实验通常用于评估潜在的抗肿瘤药物、免疫治疗方法或其他治疗策略的有效性。通过在裸鼠模型中进行实验，可以更好地理解肿瘤的生物学特性，并为临床治疗提供重要的参考依据。

实验步骤

1.准备工作：准备对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的肿瘤细胞。

2.细胞收集：弃掉旧培养基，用PBS清洗细胞1-2次（去除细胞中的血清），使用胰酶消化细胞，制备成细胞悬液，离心，去上清，接着用PBS或者无血清培养基重悬细胞并进行细胞计数，计算所需的终浓度。通常皮下瘤接种时，使用的细胞量为每支1-5×106个细胞，接种体积为0.1毫升，因此细胞悬液的浓度约为1-5×107个细胞/ml。

3.裸鼠接种：用左手固定裸鼠后，在其左侧腋窝处进行皮下注射。注射时，将针头深入皮下约1厘米，注射体积为100微升在接种过程中，应将细胞悬液放置在冰上，以减缓细胞凋亡。

4.接种后处理：接种完成后将裸鼠放回其笼中继续进行饲养，大约1周后可以观察到肿瘤的形成。根据实验设计，在肿瘤体积未超过1000mm³之前，需要对裸鼠进行无痛苦死亡，并取出肿瘤进行后续处理，如取瘤子拍照或活体成像。

如图为裸鼠成瘤实验结果示例（对照组与处理组）：

注意事项

1.细胞在指数生长阶段收集非常重要，因为细胞状态对细胞系移植后的活力有着极大的影响。如果发现细胞系在异种移植形成的肿瘤活力较差，可以考虑使用Matrigel作为注射混合物，为植入提供丰富的基质环境。

2、在接种时，针头应深入皮下约1厘米，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出的可能性。注射时，针头应向前方穿行，且在注射前轻微移动针头，以确保针头处于皮下。如果针头能够移动，则表明它在皮下位置，否则可能在皮内或肌肉内。

3、注射前，一定要排去针管内的空气。

4、每天监测裸鼠的存活和肿瘤生长是非常重要的，通常需要测量肿瘤的最大（L）和最小（W）长度。一般来说，大约一周左右就可以观察到米粒大小的肿瘤。

5、细胞消化后应立即移植到裸鼠皮下，最好在30分钟内完成。在过程中，将细胞悬液置于冰上以减缓细胞代谢。

6、在接种前，使用枪将细胞悬液充分吹散，以确保细胞均匀分散，防止细胞聚集并降低其存活率。

7、要注意伦理问题，为避免肿瘤过度生长，一般不建议超过1000mm³。

8、取下瘤子后，将一部分冻存于液氮中，以备将来提取蛋白质和RNA使用；另一部分则用福尔马林固定，用于免疫组化，免疫荧光等实验。

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