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    裸鼠皮下成瘤实验

    发布时间: 2024-05-24  点击次数: 160次

    裸鼠皮下成瘤实验用于研究肿瘤的形成、发展以及针对肿瘤的治疗方法。裸鼠是一种缺乏免疫系统的小鼠品种,因此能够更容易地接受移植的异种组织,比如人类肿瘤细胞。在这种实验中,通常会将人类肿瘤细胞注射到裸鼠的皮下组织中,形成肿瘤。然后观察肿瘤的生长情况、病理学特征以及对治疗方法的反应。


    此实验通常用于评估潜在的抗肿瘤药物、免疫治疗方法或其他治疗策略的有效性。通过在裸鼠模型中进行实验,可以更好地理解肿瘤的生物学特性,并为临床治疗提供重要的参考依据。


    实验步骤

    1.准备工作:准备对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的肿瘤细胞。


    2.细胞收集:弃掉旧培养基,用PBS清洗细胞1-2次(去除细胞中的血清),使用胰酶消化细胞,制备成细胞悬液,离心,去上清,接着用PBS或者无血清培养基重悬细胞并进行细胞计数,计算所需的终浓度。通常皮下瘤接种时,使用的细胞量为每支1-5×106个细胞,接种体积为0.1毫升,因此细胞悬液的浓度约为1-5×107个细胞/ml。


    3.裸鼠接种:用左手固定裸鼠后,在其左侧腋窝处进行皮下注射。注射时,将针头深入皮下约1厘米,注射体积为100微升在接种过程中,应将细胞悬液放置在冰上,以减缓细胞凋亡。


    4.接种后处理:接种完成后将裸鼠放回其笼中继续进行饲养,大约1周后可以观察到肿瘤的形成。根据实验设计,在肿瘤体积未超过1000mm³之前,需要对裸鼠进行无痛苦死亡,并取出肿瘤进行后续处理,如取瘤子拍照或活体成像。


    如图为裸鼠成瘤实验结果示例(对照组与处理组):裸鼠皮下成瘤实验


    注意事项

    1.细胞在指数生长阶段收集非常重要,因为细胞状态对细胞系移植后的活力有着极大的影响。如果发现细胞系在异种移植形成的肿瘤活力较差,可以考虑使用Matrigel作为注射混合物,为植入提供丰富的基质环境。


    2、在接种时,针头应深入皮下约1厘米,以减少注射后细胞悬液从针眼溢出的可能性。注射时,针头应向前方穿行,且在注射前轻微移动针头,以确保针头处于皮下。如果针头能够移动,则表明它在皮下位置,否则可能在皮内或肌肉内。


    3、注射前,一定要排去针管内的空气。


    4、每天监测裸鼠的存活和肿瘤生长是非常重要的,通常需要测量肿瘤的最大(L)和最小(W)长度。一般来说,大约一周左右就可以观察到米粒大小的肿瘤。


    5、细胞消化后应立即移植到裸鼠皮下,最好在30分钟内完成。在过程中,将细胞悬液置于冰上以减缓细胞代谢。


    6、在接种前,使用枪将细胞悬液充分吹散,以确保细胞均匀分散,防止细胞聚集并降低其存活率。


    7、要注意伦理问题,为避免肿瘤过度生长,一般不建议超过1000mm3


    8、取下瘤子后,将一部分冻存于液氮中,以备将来提取蛋白质和RNA使用;另一部分则用福尔马林固定,用于免疫组化,免疫荧光等实验。


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