销售热线

19126518388
  • 公司动态NEWS

    您当前的位置:首页 > 公司动态 > 无血清冻存液的一般冻存步骤分享

    无血清冻存液的一般冻存步骤分享

    发布时间: 2021-11-05  点击次数: 435次
       无血清冻存液可即开即用,方便省时。无血清成分,化学成分明确。快速冷冻,可直接置于-80℃冰箱冷冻。高复苏活率,有效保护细胞。
      无血清冻存液的一般冻存步骤如下:
      1.选择处于对数生长期的细胞,在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min,10分钟)。
      2.去上清液,加入含20%小牛血清的完全培养基,于4℃预冷15分钟后,逐滴加入已无菌的DMSO或甘油,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,细胞浓度为3×106-1×107/mL之间。
      3.将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中,安瓿装1-1.5mL在火焰喷灯上封口,封口处要完全封闭,圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。
      4.将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜,次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤:
      先将安瓿置入4℃冰箱中2-3小时,再移至冰箱冷冻室内3-4小时(此步可省略),再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时,最后沉入液氮中。
      细胞冻存在液氮中可以长期保存,但为妥善起见,冻存半年后,最好取出一只安瓿细胞复苏培养,观察生长情况,然后再继续冻存。
在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]