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RNAiMAX转染的主要途径探讨
发布时间： 2022-04-11 点击次数： 2228次RNAiMAX转染是指将外源分子RNA导入真核细胞的技术，它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。细胞转染可分瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。RNAiMAX转染的一般途径如下：一、物理介导1.电穿孔法电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。本法需用特殊设置（电穿孔仪），把悬浮状态的受体细胞和供体RNA共同放入皿中（或杯中），再施以高压电脉冲，能够促进RNA通过细胞膜而进入胞内，并可整合到细胞的RNA中，使细胞发生转化。若转移的RNA为带有选择标记基因的质粒，也可在选择培养基中进行鉴定。2.显微注射本法是借助显微注射器直接把RNA注射入核内，使之发生整合入受体细胞基因组中的技术。本技术需要有严密无菌的净化室，以免敞开操作污染，同时要能有自动拉针仪以制备显微针，一般用手动拉针器拉制时要能使针末端有一个0.6cm长的细部，太长易折断，针尖开口为2-3μm间，针口小于1μm更佳，针尖开口大于5μm易刺伤细胞。3.基因枪基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内。可以将大分子导入细胞。二、化学介导1.磷酸钙共沉淀法磷酸钙被认为有利于促进外源RNA与靶细胞表面的结合。氯化钙+RNA+磷酸缓冲液按一定的比例混合，形成极小的磷酸钙-RNA复合物沉淀黏附在细胞膜表面，借助内吞作用进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要。2.脂质体转染中性脂质体是利用脂质膜包裹RNA，借助脂质膜将RNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，RNA并没有欲先包埋在脂质体中，而是带负电的RNA自动结合到带正电的脂质体上，形成RNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。3.多种阳离子物质介导DEAE-葡聚糖介导的转染，原理可能是通过内吞噬作用而使RNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验。不适用与稳定转染，转染时要除去血清。三、生物介导病毒介导的转染，以病毒作为载体，通过病毒感染的方式将外源RNA导入到细胞中，其中以逆转录病毒及腺病毒转染体系常用。
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