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    RNAiMAX转染的主要途径探讨

    发布时间: 2022-04-11  点击次数: 276次
       RNAiMAX转染是指将外源分子RNA导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。细胞转染可分瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。
      RNAiMAX转染的一般途径如下:
      一、物理介导
      1.电穿孔法
      电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。本法需用特殊设置(电穿孔仪),把悬浮状态的受体细胞和供体RNA共同放入皿中(或杯中),再施以高压电脉冲,能够促进RNA通过细胞膜而进入胞内,并可整合到细胞的RNA中,使细胞发生转化。若转移的RNA为带有选择标记基因的质粒,也可在选择培养基中进行鉴定。
      2.显微注射
      本法是借助显微注射器直接把RNA注射入核内,使之发生整合入受体细胞基因组中的技术。本技术需要有严密无菌的净化室,以免敞开操作污染,同时要能有自动拉针仪以制备显微针,一般用手动拉针器拉制时要能使针末端有一个0.6cm长的细部,太长易折断,针尖开口为2-3μm间,针口小于1μm更佳,针尖开口大于5μm易刺伤细胞。
      3.基因枪
      基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内。可以将大分子导入细胞。
      二、化学介导
      1.磷酸钙共沉淀法
      磷酸钙被认为有利于促进外源RNA与靶细胞表面的结合。氯化钙+RNA+磷酸缓冲液按一定的比例混合,形成极小的磷酸钙-RNA复合物沉淀黏附在细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要。
      2.脂质体转染
      中性脂质体是利用脂质膜包裹RNA,借助脂质膜将RNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同,RNA并没有欲先包埋在脂质体中,而是带负电的RNA自动结合到带正电的脂质体上,形成RNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。
      3.多种阳离子物质介导
      DEAE-葡聚糖介导的转染,原理可能是通过内吞噬作用而使RNA转导进入细胞核,此法只适合暂时转染实验。不适用与稳定转染,转染时要除去血清。
      三、生物介导
      病毒介导的转染,以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源RNA导入到细胞中,其中以逆转录病毒及腺病毒转染体系常用。
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