-
raw 264.7巨噬细胞表面蛋白酶的表达解析
发布时间： 2025-10-16 点击次数： 20次提起巨噬细胞，人们常想到它“吃掉”病原体的场景。raw 264.7巨噬细胞更像一位多才多艺的指挥官：一边吞噬，一边把多种蛋白酶摆到细胞膜外，剪切、激活或降解周围的蛋白质，从而引导炎症走向。要想知道这些“分子剪刀”何时出现、出现多少，就得先过三关：分离、标记、定量。一、分离常用的来源是腹腔灌洗液：向大鼠腹腔注射预冷PBS，轻轻按摩后回抽，可获得＞85%纯度的巨噬细胞。若需组织原位巨噬细胞，则把肝或脂肪垫剪碎，用胶原酶Ⅳ消化30min，再通过CD11b+F4/80+磁珠或流式分选，就能拿到“三阳性”群体。二、标记膜蛋白酶多为跨膜或糖基锚定蛋白，如基质金属蛋白酶-14（MT1-MMP）、CD26、ADAM17等。用荧光抗体标记时，需先在4℃下做Fc受体阻断，避免非特异结合；随后与抗体孵育45min，即可上机检测。若目标丰度低，可采用生物素-链霉亲和素二次放大，信号可再增5-10倍。三、定量流式细胞术给出的仅是相对荧光强度。要换算成每个细胞的抗原数，可借助定量微球标准曲线：微球预先偶联已知量的抗小鼠IgG，与样本同行染色，通过荧光强度-分子数标准曲线，即可把MT1-MMP的“平均荧光2570”换算为“约1.8×10⁵分子/细胞”。如此，不同实验批次的数据就能横向比较。场景举例：腹膜透析模型中MMP-12的时空表达一项研究用高糖腹透液持续刺激大鼠，第7天即可检出腹膜巨噬细胞表面MMP-12显著上调；到第28天，其mRNA水平升高4.3倍，膜定位蛋白增加2.1倍，提示长期刺激促使细胞把更多MMP-12送到膜外，参与腹膜胶原重塑。从腹腔灌洗到流式定量，只需三步，就能把巨噬细胞“谁、何时、多少”表达膜蛋白酶说得清清楚楚。掌握这套流程，我们就能在脓毒症、组织纤维化或肿瘤微环境中，追踪免疫应答的“剪刀手”们如何剪出炎症的结局。- 下一篇：没有了
- 上一篇：低内毒素胶原蛋白上DNA重组技术的应用
销售热线
