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    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    发布时间: 2021-08-18  点击次数: 2238次

    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?


    血清热灭活


    1. 为何会有热灭活血清呢?

    加热可以灭活补体系统。启动的补体系统参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


    2. 血清热灭活是否必要?

    血清热灭活的步骤在1970年代就已建立,至今成为很多实验室的常规血清前处理步骤;但许多先前认为必须热灭活的原因,却早已经不再成立:

    ●去除支原体污染?
    早期血清加工使用的450nm滤膜,早已被100nm滤膜取代;且随着加工技术的创新及严格的监控,血清产品早已没有支原体污染的疑虑。

    ●去除补体等对热敏感的物质? 
    胎牛血清中含有的补体仅为成年牛血清5-50%,而C3(补体中引起免疫反应的主成分)在胎牛血清中则几乎不能检出,直接使用血清对大多数的细胞株没有负面影响。

    实验显示,大多数的细胞不需要热灭活血清,对于非必须的细胞来说血清灭活对于细胞生长只有微小甚至无任何作用,还可能造成生长速率降低,沉淀物还会显著增多,不利于细胞观察。因此,若非必须,不需要对血清进行灭活处理。


    3. 血清热灭活对细胞生长有帮助吗?

    细胞生物学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响,发现11株细胞中,热灭活对6 株细胞有负面影响(红)、3株无影响(绿)、2株有微弱正面改善(黄)。


    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    ▲ 使用未灭活或灭活血清的细胞生长状况


    所以,在正常操作下,热灭活通常对“细胞生长"没有明显的促进作用,反而会破坏血清内生长因子,维生素,氨基酸等珍贵物质,降低细胞增殖速度。



    4. 血清热灭活的缺点?

    若实验员设错水浴温度或忘记按计时器,都会导致过高的加热温度(下图)或过长的加热时间(下图),进而大大降低血清的功能,影响细胞生长的表现。

    缺点1:

    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    ▲ 过高的加热温度降低大多细胞株生长速度(仅一株未受明显影响)


    缺点2:

    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    ▲ 过长的加热时间降低大多细胞株生长速度(仅一株未受明显影响)


    灭活加热过程会增加血清的沉淀状况,而沉淀又常常被认为是微生物的污染,进而耗费大量时间及精力验证是否污染,导致实验一再拖延。


    5. 若细胞一定要使用热灭活血清怎么办?

    将需要进行处理的血清置于56℃水浴30min,建议加放空白对照(同体积水)使用温度计测温,以测得温度为56℃时为计时起始点,加热中可不时轻度旋转混匀血清。

    在灭活过程中,除了需要严格监测加热温度及认真计算时间,还有几个小技巧可以注意噢!

    灭活时,水浴槽水面与血清液面等高!

    使用水浴槽时,大多数人为避免血清瓶浮起来,会减少水浴槽内的水量,让水面降低;数据显示,降低水面也会使瓶内加热不均、拉长加热时间,增加血清破坏程度;所以还是建议将水浴槽内水量增加,让水面与血清液面等高,让血清最大面积的接触水流,提高灭活效率!


    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    ▲ 对比图


    至于血清瓶漂浮的问题,套上烧瓶用铅环(下图)就解决啦!

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    ▲ 固定

     

    灭活后,使用冷水浴降温!  

    灭活后如果直接放在室温或4度冰箱冷却,仅靠空气传导散热,冷却效果差(下图),使得实际降温时间拉长,对血清的影响较大;反之,流动的冷水浴散热速度较快,冷却效果佳,缩短降温时间的同时,也减少对血清的破坏。


    血清知识——热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?

    ▲ 对比图


    现代血清加工技术进步,热灭活已成为非必要步骤。热灭活对细胞生长没有明显促进作用,反而会破坏血清、增加沉淀状况。除非文献指出该细胞必须使用灭活血清,一般细胞培养可省略血清热灭活步骤。

    如果必须使用灭活血清,加热时水浴槽水面高度尽量与血清液面等高;灭活后使用冷水浴取代冰箱降温,能大辐度减少对血清的破坏。直接选择购买已灭活的血清产品,也是个好选择噢!


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