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    血清沉淀是否会影响细胞生长?如何避免?

    发布时间: 2021-08-18  点击次数: 419次

    血清沉淀是否会影响细胞生长?如何避免?

    血清是细胞培养试剂中最基础普遍的试剂之一,之前我们已经介绍过了有关特殊加工工艺血清的一些小知识(了解和认识胎牛血清,特殊加工工艺血清,您知道几种?),那么今天我们将继续了解有关血清沉淀与血清热灭活的相关知识~

    血清沉淀是否会影响细胞生长?如何避免?



    血清沉淀

    1. 血清沉淀是什么?  

    血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多。主要有纤维蛋白(絮状沉淀)、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘连蛋白、磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀)、胆固醇等。

    ●纤维蛋白(Fibrin)

    血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。


    血清沉淀是否会影响细胞生长?如何避免?

    ▲ 纤维蛋白沉淀图


    ●磷酸钙(Calcium Phosphate)

    这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当血清在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微生物污染。

    ●其他成分(Other)

    血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。



    2. 沉淀是如何形成的?          

    造成沉淀的主要原因是温度的改变、热灭活、反复冻融、长期储存于2-8℃或者室温。



    3. 血清沉淀会影响细胞培养吗?

    我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多用户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

    磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微生物污染。

    为防止这类误解的产生,我们不建议用户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。并且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微生物污染。

    Zeta Life血清经过3次0.1μm过滤除菌,低内毒素,通过血红蛋白测试合格,经美国农业部(USDA)认证。



    4. 如何避免血清沉淀                

    ●正确解冻

    首先,应按照逐步解冻的方式正确解冻血清:从-20℃取出后,置于4℃冰箱缓慢解冻,最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或37℃水浴解冻,则非常容易产生沉淀。在解冻过程中,请注意,应时不时缓慢摇晃血清瓶,可减少沉淀的产生。为避免反复冻融,建议您将血清分装使用。

    ●使用和保存注意事项

    血清沉淀很难预测和避免,出现沉淀后也无需担忧,这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能:

    1) 热灭活;

    2) 37℃培养;

    3) 反复冻融;

    4) 伽马射线照射;

    5) 2-8℃长期保存;

    6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定);

    ●血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象,这一点可以在各品牌网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。


    5. 有沉淀时如何处理?            

    我们建议您采用2000rpm离心5分钟,取上清使用就好,比过滤方便,不需要另外准备滤芯和针筒,且不容易污染。


    总结建议

    血清产品中出现沉淀属于正常现象,不会影响到血清的品质,对细胞培养也不会产生影响,大家可以放心使用,若不立即使用,血清应保存在-20℃以下。




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