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    基因研究,我该拿你怎么办?

    发布时间: 2021-09-01  点击次数: 288次

    有时候小伙伴们拿到一个 Gene-A,可能是芯片筛查的结果,可能是导师拍脑袋的结果,这个 A 很低调,被人研究的颇少,作为一个基础研究的新手,简直一头雾水!

    凡是都有规律可循。如果你文献看的没有那么多,脑洞未开,下面的保守方法可以适合你进行初步的尝试。但是要提醒小伙伴们不时的追踪一下文献研究进展,更多的时候不是为了知道某个分子或者某个领域研究的最新情况,这些对于基层科研人员的意义并不是很大;而是为了发散自己的思维,提炼别人的研究设计思路!


    下面这几步,对于刚刚上手实验的小伙伴来说,应该有所帮助。

    1.确定 A 研究的价值,即临床组织样本/相关细胞系中有没有差异性表达

    肿瘤组织样本
    分析A在临床组织中的表达是否与肿瘤进展程度或者例如大小、转移灶、预后等相关


    肿瘤细胞系分析A在临床癌组织、肿瘤细胞系中的表达对比癌旁组织和正常细胞系是否差异表达


    2. 确定 A 能够对某一细胞表型产生一定的影响

    shRNA慢病毒干扰载体







    敲除/过表达A






    细胞增殖
    过表达载体细胞凋亡
    突变载体细胞周期
    敲除载体细胞运动

    细胞侵袭


    3. 确定 A 能够对小鼠的肿瘤形成的作用是否与上一步较为一致。

    选择动物模型进行功能验证,一般选择裸鼠进行成瘤实验

    裸鼠种植瘤需注意:

    ●肿瘤细胞的状态

    ●细胞的数量:每只注射2×106-107

    ●裸鼠的选择:5-8周龄

    ●种植部位:血供丰富区域,如腋窝中后部、腹股沟中上部。


    4. 找出 A 的作用机制

    Microarray/pathway array/相关芯片分析A影响下游基因的mRNA/通路/蛋白表达变化


    qRT-PRC、Western blot 验证


    验证A调控B/C/D的特异性

    结合增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭等表型

    另外还可以同步研究一下 A 本身是否受到甲基化或者乙酰化等表观遗传调控。


    这样是否简单易懂呢?小伙伴们不妨针对自己的某基因研究,做出一个类似的技术路线图,做完一步划掉一步。那些表型也不是都做的,要看文献或者自己分析一下你研究的基因 A 是否跟一些例如增殖相关基因或者周期相关基因等有联系,或者涉及到某些明星通路等。

    以上为常规手段,可为基础薄弱的小伙伴寻求大方向。如果想要高大上的研究设计,每步还请自行查阅文献加以创新。

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