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    一句话知晓实验方法怎么选?

    发布时间: 2021-09-08  点击次数: 491次

    在分子生物学实验室里的玩法,无非就是用某种特定的刺激物(如细胞活素)去刺激一些细胞或组织,让它们 high 起来,然后分析细胞对这些外源刺激物的反应,检测细胞内哪条信号通路被激活或失活,或者什么蛋白被分泌出来。这里面就有很多种方法,哪种最合适,关键看你要检测这个反应的哪个方面的特性。

    WB 

    建立蛋白质的个人档案 

    一个典型的免疫印迹实验(Western Blot,WB)可检测信号通路中某种蛋白质的特性、表达和分布,分析容量大、敏感度高、特异性强。但至于蛋白-蛋白相互作用则要用另一种更复杂的方法,即免疫共沉淀法( Coimmunoprecipitation,Co-IP),它接近细胞内的生理情况,是以成为经典方法。

    SPR 

    想知道 Ta 和 Ta 能有多亲密? 

    表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)除了研究蛋白-蛋白相互作用(例如受体-配体相互作用),还有可研究小分子-蛋白或细胞-蛋白的相互作用。这种方法不需要标记蛋白(荧光标记或同位素标记),还可以实时定量分析这些相互作用的亲和力、热力学、动力 学特性。SPR 是分析动力学和亲和力的金标准。

    这些分析用酶联免疫吸附实验(EenzymeLinked ImmunosorbentAssay,ELISA)也可以做,原理差不多。

    PCR 

    把小树养大才能更好地招风 

    转录因子激活并和靶基因结合之后,该基因就被激活。PCR(Polymerase Chain Reaction)或Real Time PCR 可以把特定的 DNA 序列大幅扩增,便于检测活性基因的表达情况。

    ELISA 

    追踪到天涯海角! 

    如果要看看细胞外如何,比如细胞培养上清液或体液中的某种蛋白质分泌情况,则通常选用 ELISA,从而获知相应基因的活性。


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