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    免疫组化(IHC)的10大实战经验(附临床上常用免疫组化指标)

    发布时间: 2021-09-08  点击次数: 562次

    1.把要做的切片先分好,做几个抗体可分几盒,不正常组织与正常组织要分开。其余做预实验用。 

    2.选择实验要做的抗体时,要结合他们的正常组织和癌组织的分别表达率。

    3.试剂盒的选择可结合生物素强弱的情况。如:肝组织生物素含量高,S-P 试剂盒生物素含量也高,故不能配合使用。 

    4.每次开始做时,都必须先清点实验的必需品是否齐全。想好可能发生的意外,并先想好补救措施。当抗体不够用的情况下,原先买的抗体最好不要用完,留做可能需要的验证试验。新的抗体要尽量同公司,同批号。

    5.烤片(单一或综合)程度要适情况而定,可中途拿出甩一甩,尽可能先放在烤箱里烤 3 小时以上。切勿把片烤得太久了。程度刚好,脱蜡效果才会好。注意做好不同条件的切片标记。注意温度稳定,再烤片。 

    6.二甲苯脱蜡。温度过低时,可先把二甲苯整罐放进烤箱加热,或者可把片放在二甲苯里一起加热脱蜡,这样效果会更好;若温度适宜,那还是在室温下脱蜡,要不可能会适得其反。时间也是适情况而定。

    7.高压修复时,要注意稀释比例,修复液的种类(EDTA 不可以重新进行利用,可能发生交叉作用),PH 值等。高压锅内压力未降至正常时不可打开,压力正常后可多放会儿,能更好的利用余压,把握程度。若是多次修复,每次都需先把锅内热水倒掉,换冷水,保证条件的可重复性。 

    8.抗体反复冻融可使效价降低。抗体要防止污染。不可用塑料保存,塑料可吸附抗体。抗体稀释:应遵循“现用现配"的原则,对于 PBS(其他稀释液,注意 PH 值,PBS 为偏中碱性)稀释的抗体最好要当天使用。稀释比例恰好为佳,注意前带和后带效应。

    9.吹干封片时不能有泡泡。若是没封好,可进行二甲苯、酒精脱树胶,吹干再次封片,但镜下效果会明显变差。因而,若没必要,最好不要再次脱胶。DAB 显色需用中性树胶封片,AEC (易溶于有机溶剂)需用水性胶封片。 

    10.刚封完的载玻片会移动,故切片还没干时,尽量不要碰到盖玻片,可避免树胶溢出,片的整体效果不好。


    附录:临床上常用免疫组化指标 

    通常恶性肿瘤,免疫组化耐药预后标记(共 4 个 marker)为:P-gp,GSTπ,TOPOII,Ki-67。而乳腺癌免疫组化耐药预后标记(共 7 个 marker)为:P-gp,GSTπ,TOPOⅡ,Ki-67,ER, PR,C-erbB-2。


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