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    消除细胞聚团就是这么简单!

    发布时间: 2021-09-22  点击次数: 549次

    当在生长培养基中进行单悬浮细胞培养时,样本中出现细胞丢失的情况并不少见。当细胞破裂时,它们会释放DNA和碎片,导致细胞聚集成大团块,使其难以扩张。细胞聚团既可导致细胞凋亡,也可引起细胞死亡。


    随着更多的细胞死亡并释放碎片,问题将继续恶化。尽可能快地处理或避免细胞聚团将有利于实验的后续结果。


    为什么细胞聚团是个问题?

    单细胞悬浮培养基的目标是为靶细胞提供尽可能多的生长资源。这包括充足的生长营养和充足的繁殖空间。当细胞聚集在一起时,它们会相互限制,降低细胞对营养吞吐量,最终影响生长结果。

    细胞聚团也会导致靶细胞的回收率降低,并且会干扰标记,这也是悬浮细胞标记的成功率不高的原因,某些细胞分析方法,如流式细胞术,需要对细胞进行适当的分离。在流式细胞术中,大量细胞以快速的液流通过机器。这台被称为细胞仪的机器检测不同细胞之间物理特性的差异,并使用荧光灯对它们进行相应的标记。如果细胞通过试管时聚集在一起,细胞仪将很难准确测量它们的特性。这会导致它们被不正确地分类,并对实验结果产生负面影响。


    细胞聚团的原因

    防止细胞聚团的最佳方法之一是了解是什么导致了细胞聚集,并采取预防措施避免这些事件的发生。培养物中细胞可能聚集的一些原因包括: 

    1.过度消化-某些用于组织分解的酶,如胰蛋白酶,如果过量使用会导致细胞结块

    2.环境压力-物理压力和反复的温度变化会导致细胞死亡,从而导致细胞的“粘性"的DNA分子将相邻的细胞连接在一起

    3.组织分解-在制备单细胞悬浮液时,使用酶、机械或化学分解策略可使细胞破裂,从而导致碎片的聚团。 

    4.过度生长-当细胞在其培养基中密度过大的时候,细胞将开始溶解并释放碎片,碎片中的粘性因子会将细胞聚集到一起

    5.污染-某些细菌和真菌病原体导致细胞溶解;结块通常是细胞培养物被污染的迹象

    6.虽然其中一些是由于实验错误而发生的,但实际也有部分的细胞具有天生的聚团现象,比如大部分的半悬浮细胞,BV-2 ,NCI-H716等等,半悬浮细胞一般在在整体汇合度70%左右就要进行传代操作了,这样可以降低细胞聚成大团块的风险。


    怎么减少细胞聚团?

    1. 在开始实验之前,可以采取一些措施来防止细胞聚集。例如,一种名为DNA酶I的内切酶可以混合到培养基中,从破裂的细胞中分离DNA。分解这些多余的碎片有助于保持靶细胞生长的空间。然而,dna酶I使用过多会导致细胞突变,最终会影响您的实验效果,所以实在不是逼不得已,不建议使用。

    2. 通过适当的处理和设备使用,也可以减少结块。如果使用离心机分离或混合样品,将其设置为正确的速度可以减少聚团,通常情况下,较快的速度可以离心散细胞,但在高速下也必须考虑细胞的脆弱性,所以适当的延长离心的时间也不失为一种稳靠的离心散悬浮聚团细胞的方法

    3.还有一些方法可以分离细胞,这些细胞聚集在一起,不会造成过度的伤害。某些叫做螯合剂的化学物质与正电荷离子有亲和力。根据细胞聚团的性质,可以添加螯合剂来溶解它们之间的粘连,而不会伤害细胞。乙二胺四乙酸(EDTA)是一种螯合剂,常用于溶解钙粘连。 

    4.另一种细胞清除方法是氚化。氚化过程涉及到温和、重复的吸管,以打破细胞间的弱粘连。



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