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    细胞培养无小事,需注意的四个事项!

    发布时间: 2021-09-22  点击次数: 530次

    培养细胞的完全培养基一般由基础培养基(如MEM)和添加剂(血清或细胞生长因子)组成,培养基的配方都会随着细胞需要的营养不断的改进 ,而抗生素也是,广谱抗生素使用太多,会导致细胞的耐受性提高,从而产生抗性,甚至有些老师为了实验的精确性,选择不用抗生素培养细胞。


    一、基础培养基

    绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质,生物学最是通用的培养基是Dulbecco`s改良培养基——DMEM,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。细胞培养选择某种培养基,应仔细了解成分表,选择适合细胞成长的培养基 ,一般来说,悬浮细胞用1640培养基比较多,而贴壁细胞用DMEM的较为常见。

    在有些培养基中谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM含更高浓度的NaCO3,培养敏感的神经细胞时要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

    原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。所以使用L-15培养基培养的细胞一般都需要密封培养瓶,或者使用100%的空气培养。


    二、血清

    细胞在单纯的基础培养基中不能存活,在特殊类型的细胞培养中必须提供某些有营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清,血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定,广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子,常选其作增殖细胞用的血清,也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。

    血清的不同批号含有不同的成分,应该在使用前对血清进行测试。大多数试剂商提供样品,所满意的批号即可选用,这样可以一次得到足够一年用量的血清,


    三、抗生素

    在细胞培养中较为常用的抗生素是青霉素(常用浓度是25~100ui/ml)与链霉素(25~100μg/ml)。这两种抗生素常混合使用。在一些实验室里,它们常规加入所有的培养基中。庆大霉素(10~100μg/ml)通常有广谱抗菌效应,并具有溶液稳定性,一般实验室经常使用。


    四、培养的保持

    培养物是应该保持在孵箱中的。孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求,空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多,高湿度可避免培养皿中培养基的蒸发,保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水,这水应该经常换,乘水容器应经常消毒以防霉菌生长。若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过,那么要想完全去除污染则会非常困难。当培养物必须要长期保持在孵箱中时,应采用较少培养基的瓶、皿,且将盖子盖紧以避免蒸发,或采用相应的按比例供空气的孵箱。


    温度的精确调节应定期检查,孵箱温度常设置为37℃或较低温度。细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度,但当温度升至39℃时,几小时内即死亡。



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