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    常见细胞培养试剂的配制方法分享

    发布时间: 2021-09-23  点击次数: 980次

    培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。常用的细胞培养试剂包括:超纯水,平衡盐溶液,消化液,PH调整液,谷氨酰胺溶液,抗生素溶液。


    常见的超纯水

    1. 使用纯水机纯化而来;

    2. 蒸馏水和离子交换水

    3. 三蒸水


    平衡盐溶液

    1、平衡盐溶液主要由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。

    2、D-Hank’s与Hank’s的一个主要区别在于前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。

    3、配制平衡盐溶液也应当用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌.


    几种常见的平衡盐溶液配方:

    品名(单位:g/L)PBSHank‘sD-Hank‘s
    NaCl88
    8
    KCl0.20.40.4
    CaCl2
    -0.14-
    MgCl26H2O---
    MgSO47H2O-0.2-
    Na2HPO4H2O1.560.060.06
    NaH2PO42H2O---
    KH2PO40.20.060.06
    NaHCO3-0.350.35
    葡萄糖
    -1-
    酚红-0.020.02


    消化液

    (1)以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶为例,称取胰蛋白酶粉末0.625g置烧杯中,先用少许D-Hanks 或PBS平衡盐溶液(pH7.2 左右)调成糊状,然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液,并不断搅拌振荡直到搅拌混匀,置室温4 小时或冰箱过夜;

    (2)次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,定容至250ml,分装于盐水瓶或三角瓶,低温冰箱保存备用,胰酶常用浓度为0.25% 或0.125%。

    胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。

    胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但超过一定限度会损伤细胞。

    胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25% 。用滤器过滤除菌。

    胰蛋白酶液消化时间:2-10分钟,用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。


    pH调整液

    常用的有HEPES液和NaHC03溶液

     1.NaHC03溶液:NaHC03是培养基中必须添加的成分,一般情况下是按照说明书的要求准确添加,以保证培养基在5%CO2的环境下pH达到设计标准。

     2.HEPES液:HEPES是一种弱酸,中文名称是羟(乙)基(派)嗪乙硫磺酸。HEPES对细胞无毒性,主要作用是防止培养基pH迅速变动

    100X的Hepes配制:取23.8g的HEPES溶于90ml的双蒸水中 ,用1N的NAHCO3调PH至7.8-8.0之间,过滤除菌,定容至100ml.


    谷氨酰胺补充液:

    谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用,合成培养基中都要添加,由于谷氨酰胺容易降解,所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。

    一般配制为100倍浓缩液,配制时应加温至30℃,完全溶解后过滤除菌,分装至小瓶,储存于-20℃。


    抗生素溶液:

    常用的是青链霉素,俗称“双抗溶液"。

    青霉素主要对革兰阳性菌有效,链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝大多数细菌的污染。

    青霉素使用的终浓度为100000U/L,链霉素使用的终浓度为0.1g/L。一般配制成100倍浓缩液,可用PBS或培养基配制。




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