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    冻存细胞的这些坑,你踩过吗?

    发布时间: 2021-09-23  点击次数: 464次

    冻存细胞的错误时机主要有:细胞量太少,细胞状态不好,细胞变形严重,或者细胞生长堆积,一旦生长过平顶期,培养基就会变得很黄,细胞可疑污染;镜下观察细胞有很多碎片或者不明物;培养时间过长,连续培养超过二个月,细胞性状已有改变。

    选择细胞冻存的最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内开始冻存一批,再往下传的用来做实验。


    细胞太少

    冻存时细胞浓度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,复苏很难成功,原因:细胞和细胞间会又间隙接触反应, 解决:离心后调整细胞浓度,把细胞种更小的孔板中.


    培养基很黄,冻存细胞后复苏不长

    在细胞生长平顶期冻存的细胞会在解冻后有几天停滞状态,原因:细胞在生长平顶期已经停止生长,冻存后也保持互相间抑制的信号,解决办法:用胰酶消化重新铺板;


    细胞污染或者很多小黑点

    冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。复苏细胞的时候尽量避免冻存管接缝处沾水,防止支原体污染,实验室定期用过氧化氢熏蒸,细胞小黑点增多时用支原体检测试剂盒检测,并且及时清除,趁高温假给细胞来次清洁吧,支原体去除试剂,*防止支原体污染好帮手


    程序降温盒导致的细胞复苏不活

    放在-80 度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温,使用普通的冻存液抗氧化和抗冻添加物不够,导致细胞内产生大量冰晶杀死细胞.

    推荐品牌无血清细胞冻存液,冻存液含有抗氧化因子,可在细胞冻存时防止细胞产生氧化反应,给细胞一个好的休眠环境,含有抗冻组分,让大部分细胞免受冰晶杀戮,好不好用一下就知道!


    -80°存放太久导致的细胞复苏不好

    原因:冰箱的温度难以恒定:开门 / 关门过于频繁,冰箱电压不稳等.解决办法:尽快转入液氮。


    液氮不足

    液面不能漫过所有细胞。解决:定期测量液氮储备,保证细胞全部浸在液面下,小提醒:有几个细胞需要气相保存的,不能浸入液氮里,挪细胞的时候需要注意一下。


    取错细胞

    找不到 / 拿错冻存管。原因:没有标记好细胞,没有做好库存记录,解决:冻存细胞时在每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册。

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