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    细胞培养之真菌细菌污染的防治方法

    发布时间: 2021-09-24  点击次数: 2055次

    请遵守细胞污染永恒定律:无论什么细胞只要是不重要的细胞污染了,立刻加84弃之,重新复苏新冻存管培养;实在需要挽救的请参考以下:


    细菌污染:主要有洋葱霍尔伯德菌型污染

    确定是非常珍贵的细胞 建议分别配置含10倍庆大霉素和两性霉素溶液(G/A)的PBS和5倍庆大霉素和两性霉素溶液(G/A)的完全培养基各一份。然后先用10倍双抗的PBS洗涤细胞5-10次, 然后用5倍双抗的完全培养洗涤细胞3次以上,再加上含双倍的G/A溶液放培养箱培养,一个小时后换液,持续4个小时后,再加上正常培养细胞所需的抗生素,过夜,到最终确定细胞没有任何污染物,因此时细胞受损过大,建议优化培养基方式(血清提高2%-5%)或者立即冻存细胞,一个月后复苏。


    真菌污染:

    污染的多是曲霉菌,白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,孢子菌,真菌主要以预防为主,防治为辅,已经污染了,建议采用以下方法:

    1. 细胞一旦污染,很难挽救,即使使用制霉菌素或放线菌素D,也是伤敌八千自损一万的办法,可使用抗生素进行查杀,但是高浓度的抗霉菌素对细胞有毒性作用。

    2. 把所有细胞从污染的CO2孵箱转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(全部,尤其四个角)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞;

    3. 用0.5%新洁尔灭擦拭超净台和墙壁,确保不留死角,地面用新洁尔灭消毒液拖地。

    4. 将环境彻底消毒,整个培养间高锰酸钾或者乳酸熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天。


    真菌污染预防方法:

    1),将细胞移出来,用微量硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里加适量硫酸铜或者酸氢二钠高盐液体防止霉菌

    2)孵箱应定期清洁,大约一个月左右清洁一次,

    3)可在培养基里加两性霉素或制霉菌素)或[放线菌素D或双抗进行预防。

    4)最主要的还是要培养良好的无菌观念,实验室尽量不要大声说话,佩戴好口罩,手套,操作时应小心,避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜,这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的繁殖提供了很好的条件。




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