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    复苏细胞的注意事项

    发布时间: 2021-09-30  点击次数: 845次

    到了复苏细胞开始实验的环节了 ,以下是整理的一些复苏细胞的注意事项:

    1. 细胞储存在液氮中,温度达-196℃,理论上储存时间是无限的。只要一直在液氮,冻存没有问题,那么复苏也不会出现很大的问题,不存在有效期限,细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,复苏一定越快越好,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。

    2. 取细胞时应做好防护措施,带好防冻手套,护目镜。细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。

    3. 必须在1-2min内使冻存液完全融化,复苏温度太慢,会造成细胞的损伤。如果冻存管的壁较厚,隔热效果较好,可以适当提高水浴温度(37℃~40℃)。冻存液建议选用进口产品,DMSO含量为5%,并添加海藻糖和丙二醇以及细胞生长因子,细胞成活更高.

    4. 提前预定超净台,减少复苏后插在冰盒里等待的时间。复苏后若需要长时间(>1h)等待,建议往离心管加15ml以上培养基摇匀以稀释DMSO给细胞带来的毒性作用。对于不离心直接加入培养基培养的细胞,培养基的加入量是个需要考虑的问题。主要涉及DMSO的浓度,一般DMSO含量为5%的细胞,在7.5ml的完全培养基里不受影响,细胞可正常生长(这招很管用哦)。

    5. 关于细胞溶解后,是否需要离心的问题,需要根据特定的细胞情况而定。主要有两种方式。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液(后贴壁后即换液)。因为离心的目的是两个,去除DMSO,去除死细胞,这个是标准流程。但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染。另一种是须离心后,将冻存液倒干净,且一定要倒干净。悬浮细胞和贴壁比较慢的细胞一定要离心,比如NCI-H716,和LNCAP等特殊培养方式的细胞。

    6. 有些细胞复苏后一星期才有起色,切忌要有耐心,不要换液,耐心等待,两周后再做决定。不要复苏三四天后,细胞没有任何动静,认为失败,倒掉所有细胞。MLO-Y4就有这种毛病,技术复苏后各种花式优待它就是不长,然后大家都不想理它了,放了一周多拿出来,竟然长满了。


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