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    我的脂质体转染实验效率低,怎么办?

    发布时间: 2021-10-09  点击次数: 651次

    脂质体介导转染实验指的是,脂质包裹待转染DNA形成复合体,与细胞膜融合或内吞,进入细胞。然而,大量的脂质体-DNA复合体,只有一小部分能运送到细胞质并进入细胞核中。

     

    如何提高脂质体介导转染效率的关键,就在这一步:提高复合体进入细胞质的效率。

     

    1、避免使用阴离子试剂,使用新一代聚阳离子试剂,适用范围广,毒性相较以前的脂质试剂小。

     

    2、使用阳离子脂质与DNA的*佳比例,以及一定数量细胞的阳离子脂质用量。可向购买试剂的公司进行询问。

     

    这是因为过量的脂质容易受到培养皿中其他带电荷物质的干扰,如细胞外基质中的硫酸软骨素。

     

    3、待转染的培养细胞应该从冻存库中重新培养。转染过程中,细胞在汇合状态不应超过24小时,单层细胞应处于对数中期。

     

    4、转染过程中,培养基不建议加入抗生素。转染试剂使细胞通透性增加,进入细胞的抗生素浓度增加,会产生一定的细胞毒性。

     

    5、某些血清蛋白可能会干扰脂质体-DNA复合体形成,因此应在无血清状态下形成复合体,后续过程可添加血清。

     

    6、提高待转染基因的纯度,DNA的260nm:280nm应为1.8 。

     

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