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    qPCR实验结果分析基本步骤(一)

    发布时间: 2021-10-15  点击次数: 4143次

    实时荧光定量PCR实验会产生大量实验数据,一般可以用PCR仪自带的软件进行收集、分析。但即使有了方便可靠的软件,我们也需要对原始数据进行检查、再分析,评估数据的质量和可靠性。


    这需要三个基本的步骤。


    第一步,查看扩增曲线,有必要时调整基线和阈值。

    qPCR实验结果分析基本步骤(一)

    Ct值由基线和阈值计算得来,所以他们的值对结果影响很大。软件会给出1个默认的基线和阈值,但不一定是最合适的,需要我们进行手动调整。

    首先进行基线的调整。


    一般范围是循环数3~15,使得靶基因的扩增信号大于背景噪声。出现不正常的扩增曲线,通常是因为设置了不正常的基线,需要对单个孔进行设置。


    比较好的做法是,基线的最小值(起始循环数)设置在背景噪声的尾巴后,最大值(结束循环数)设置为扩增起始点。


    循环范围在5个循环就可以,具体跟扩增曲线的对数图来设定。


    扩增曲线的对数图是什么?下期告诉你



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