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    qPCR实验结果分析基本步骤(二)

    发布时间: 2021-10-15  点击次数: 1892次

    阈值,我们在操作软件时上下拉动的横线,是决定Ct值的因素之一。


    阈值是荧光信号相对于基线有显著增强的点,大多数仪器会根据基线平均信号,自动计算荧光信号的阈值水平,并设置一个比平均值高10倍的阈值。


    也就是说,当基线被正确的设置了,阈值也能手动调整成正确值。

    qPCR实验结果分析基本步骤(二)

    需要注意的是:


    1、读取阈值相关的分析数据时,不能随意改变阈值的设置。只有分析不同样本,或相同样本不同靶基因时,才能调整阈值。


    2、设置阈值线时,要在扩增曲线的指数扩增区域内设置,不能在起始阶段,也不能在荧光背景(基线)区域。


    3、每次改变阈值时,要查看标准曲线的斜率和R的平方有没有改善。没有使用标准曲线时,也可以计算3个复孔(相同条件扩增的样本)的标准偏差。好的阈值应该要改善Ct值的表现。


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