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    免疫荧光技术-间接法

    发布时间: 2021-10-26  点击次数: 419次
    材料与仪器:

    抗体
    PBS 伊文氏兰
    显微镜


    实验步骤:

    1. 标本固定后,PBS洗涤3x3 分钟;

    2. 滴加一抗,37 ℃40 分钟或4 ℃过夜;

    3. PBS洗3x3 分钟;

    4.  滴加荧光标记二抗37 ℃,40 分钟;

    5.  PBS洗3x3 分钟;

    6.  0.1 %伊文氏兰复染;

    7.  PBS洗3x3 分钟;

    8.  缓冲甘油封片,镜检。


    要点:
    1.种属在进行双重免疫标记时,要选择来源于两种不同种属动物的一抗,如选择来源于rabbit和mouse的抗体,二抗则用带有不同荧光素标记的,如抗rabbit或抗mouse二抗, FITC和Tex-Red;
    2.孵育时间和温度相同的两种一抗可以同时孵育,然后加入相对应的一抗的二抗进行孵育,一抗孵育时间室温至少需要16h,二抗孵育室温不宜超过4h,选择4℃孵育比较好,背景比较清晰,另外孵育时夏天特别注意室温温度;
    3.抗体稀释液通常第一抗体选择1%牛血清白蛋白进行稀释,第二抗体选择用0.01mol/L的PBS稀释。



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