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    贴壁细胞培养

    发布时间: 2021-10-29  点击次数: 331次
    材料与仪器


    冻存细胞
    70% 乙醇 PBS 胰酶/EDTA
    25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶 CO2 培养箱


    实验步骤


    1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。

    2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起始培养基的 25 cm2 组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,将其放入 5% CO2 加湿培养箱中 37℃ 培养过夜。

    3. 吸出起始培养基,换成适当的维持培养基。将细胞放回 CO2 培养箱 37℃ 培养,每天检查细胞是否生长至汇片。

    4. 如果细胞生长至汇片,吸出培养基。

    5. 用 PBS 或胰酶/EDTA 清洗细胞,除去细胞上残留的血清,将洗液吸出。

    6. 用 37℃ 、适当体积的胰酶/EDTA 刚好覆盖单层细胞(如对于 25 cm2 培养瓶需要 0.3 ml)。消化 30~40 s(细胞应该分开),晃动培养瓶使细胞完全分开。

    7. 加入 1.4 ml 适当的维持培养基,用吸管来回吹打细胞悬液多次以打散细胞团(这些细胞用于传代)。

    8. 吸出 0.5 mL 的细胞悬液,将其加入到新的含有 30 ml 维持培养基 150 cm2 的组织培养瓶中。轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,将其放入 CO2 培养箱中 37℃ 培养直到细胞生长至汇片(大约 1 周)。大约间隔一周用维持培养基进行 1:20 稀释传代以维持细胞生长。



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