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    高效率转染N2a小鼠神经瘤母细胞的操作方法

    发布时间: 2021-11-11  点击次数: 1130次

    转染条件:

    培养板:6孔板

    转染质粒DNA大小: 6000bp

    转染试剂用量:10ul

    核酸用量:电讯

    转染时间:48小时

    转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂(AD600150)

    培养基:Z7181-500 胎牛血清

    细胞冻存:CE70100T无血清细胞冻存液


    操作步骤:

    提前 1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。

    核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 分钟。

    在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基 里面可以含有血清。

    细胞换液:转染 24 小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

    分析结果:质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率,48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率,48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。


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